马力 王亚亭

    支气管哮喘简称哮喘，是严重威胁公共健康的慢性肺部炎症性疾病。因环境因素对其发病起着重要的作用，故Strachan提出了卫生假说。Toll样受体(Toll like receptor，TLR)的发现为卫生假说提供了理论依据。TLR4主要识别革兰阴性菌的脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)成分，参与调节Th0细胞向 Th1或 Th2细胞增殖分化[1]。其中Th1应答对哮喘有保护作用，Th2能促进哮喘气道变态反应性炎症的形成。本课题针对不同浓度脂多糖对哮喘大鼠肺组织Toll样受体4表达及气道炎症的影响进行研究。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 清洁级雄性健康SD大鼠50只，体重130～150 g;4～6周龄，由安徽医科大学动物中心提供。随机将其分为对照组(A)、哮喘组(B)、地塞米松组(C)低剂量LPS组(D1)及高剂量LPS组(D2)共5组，每组10只。

    1.2 实验方法

    1.2.1 SD大鼠哮喘模型建立、样品的留取与保存

    1.2.1.1 动物模型的复制:B组大鼠第1、第8天予以OVA/Al(OH)3混合液1 ml[含 Al(OH)3100 mg和OVA 1 mg]腹腔注射致敏，第15天予以1%OVA雾化激发30 min，持续3 d。A组以0.9%氯化钠溶液代替OVA进行致敏与激发。C组:待腹腔注射1 ml含100 μg地塞米松1 h后在致敏和激发。D1组、D2组在致敏阶段每隔2 d 予以 1 ml含 0.1 μg、100 μg E.coil LPS腹腔注射，激发阶段待每次予以相同剂量浓度E.coil LPS腹腔注射1 h后在进行激发。

    1.2.1.2 样品的留取与保存:末次激发后1 d，腹腔注射麻醉采用10%水合氯醛溶液400 mg/kg，打开腹腔，腹主动脉取血，离心 10 min，3 000 r/min，吸取血清，-80℃储存备用。胸腔打开，肺组织分离，左主支气管结扎，右肺经气管行灌洗，分4次注入10 ml0.9%氯化钠溶液，轻轻按摩肺组织，30 s后回收灌洗液，回收率超过80%，然后离心10 min，3 000 r/min，取上清-80℃储存备用。细胞沉淀用于细胞总数与分类计数。左肺近肺门组织切取，4%多聚甲醛固定，原位杂交标本固定2～3 h，HE染色和细胞凋亡检测标本固定5～6 h后，转入70%乙醇，常规石蜡包埋切片[2]。

    1.2.2 试验方法:通过光镜观察肺组织病理变化及支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid ......