左文娜 王洪琴 吴干勋 李国丽 李丹

    肿瘤转移抑制基因在恶性肿瘤的发生、发展和侵袭、转移过程中发挥着重要作用。基质金属蛋白酶(MMPs)属于重要的蛋白酶类之一，其可以降解多种细胞外基质成份和血管基膜，破坏肿瘤细胞的侵袭，促进血管形成。RECK(reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazalmotifs)基因是近年来新发现的一种新型肿瘤转移抑制基因和基质金属蛋白酶抑制剂，可抑制多种MMP表达，阻碍肿瘤细胞的发生、发展及侵袭。本研究对41例喉癌患者的石蜡标本采用流式细胞术检测并分析RECK基因和MMP-14、MMP-2在肿瘤组织中表达的相关性及与病理参数之间的关系。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取我院2009年12月至2011年1月收集的72例肿瘤组织，按类型不同分为喉癌组织41例、癌旁组织16例 (距肿瘤切缘>0.5 cm)及喉部正常黏膜组织15例，分别为喉癌组、癌旁组及对照组。根据国际抗癌协会(UICC)TNM分类临床分期标准，Ⅰ～Ⅱ期17例，Ⅲ～Ⅳ期24例。喉癌组中男30例，女11例;根据术后病理，伴随淋巴结转移11例，未伴随30例;年龄40～76岁，中位年龄60岁;喉癌分型:声门上型21例，声门型15例，声门下型5例;病理学分级:G1组16例，G2组18例，G3组7例;吸烟量>400(年×支/d)者20例，≤400(年 ×支/d)者21例;所有肿瘤组织均经组织病理学确诊为鳞状细胞癌、炎症或正常组织。且术前均未行放疗、化疗等治疗措施。

    1.2 方法

    1.2.1 制备单细胞悬液:将0.5 g组织放置于120目不锈钢网上剪碎，用镊子及0.9%氯化钠溶液轻轻搓洗至自然沉淀，收集细胞悬液。再次将混悬液过滤，去除细胞团块。1 000 r/min离心2 min，再次重复弃上清液。加入1 ml磷酸盐缓冲液悬浮细胞，制成单细胞悬液。

    1.2.2 细胞的免疫荧光标记:取0.1 ml以上液体，按1∶100 浓度分别加入0.1 ml RECK、MMP-14 及 MMP-2抗体工作液，加入磷酸盐缓冲液10ml ......