张润华 王贤和 陈萍 邓守恒 蔡晓军

    ·论著·

    EGCG对5-氟尿嘧啶用于食管癌CaEs-17细胞增加疗效的实验研究

    张润华 王贤和 陈萍 邓守恒 蔡晓军

    目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)体外增强5-氟尿嘧啶(5-Fu)对食管癌CaEs-17细胞化疗敏感性的作用，并探讨可能的作用机制。方法实验分为空白对照组、5-Fu组(培养液中5-Fu终浓度为6 μmol/L)，EGCG组(培养液中EGCG终浓度为20 mg/L)、联合组(培养液中EGCG终浓度为20 mg/L，5-Fu浓度为6 μmol/L)，4组作用24 h，CCK-8法和细胞克隆形成法检测细胞增殖抑制率和存活率，金氏公式评价二药的协同效果；流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布；Transwell法检测细胞侵袭力；免疫印迹法检测突变型P53(mtP53)蛋白表达水平。结果EGCG、5-Fu均可抑制CaEs-17细胞增殖、诱导细胞凋亡、降低细胞存活率和侵袭力；EGCG、5-Fu均可阻滞细胞于G0/G1期，并能下调mtP53蛋白表达水平(P1 材料与方法

    1.1 试剂与仪器 表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、甲基纤维素(CPS4000)、碘化丙锭(PI)为美国Sigma产品；5-Fu江苏南通精华药业产品；CCK-8试剂盒购自日本同仁公司；Transwell小室购自美国Costar公司；兔抗人突变型P53(mtP53)单抗及山羊抗兔的二抗购于北京中杉金桥生物技术有限公司；其他试剂均为进口分装分析纯；Mini-Prote电泳仪(美国伯乐公司)；图像采集系统(日本Olympus公司)；Mod 550型全自动酶标仪(美国Bio-Rad公司)；Epics Elite ESP型流式细胞仪(美国Coulter公司)。

    1.2 细胞及培养 食管癌细胞株CaEs-17购自中国科学院上海细胞生物研究所，培养于含10%灭活小牛血清的RPMI1640培养基内，于37℃、饱和湿度，5%CO2条件下培养，每2～3天用0.25%胰酶消化，1∶2传代。

    1.3 CCK-8法检测单独及联合给药对细胞增殖的影响 取指数生长期CaEs-17细胞，以1×105个/孔接种于96孔板，37℃、饱和湿度，5%CO2条件下培养24 h后吸出原培养液，分为EGCG组(培养液中EGCG终浓度为20 mg/L)、5-Fu组(培养液中5-Fu终浓度为6 μmol/L)、联合组(培养液中EGCG终浓度为20 mg/L，5-Fu终浓度为6 μmol/L)，另设空白对照组(只加入RPMI1640培养基 ......