郝秀菊 刘志辉 栾文姬 王锋 苏丽娜 陈俊峰

    ·论著·

    L-鸟氨酸脱羧酶抑制剂筛选模型的建立

    郝秀菊 刘志辉 栾文姬 王锋 苏丽娜 陈俊峰

    目的基于酶促反应法，利用HPLC测定腐胺含量，评价待筛选药物对PC-3M细胞中L-鸟氨酸脱羧酶(L-ODC)活性的影响,建立鸟氨酸脱羧酶抑制剂的筛选模型。方法将与药物反应后的细胞处理样本，以TSKge lODS- 80TM凝胶色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)为分析柱，在甲醇-水(8∶2)保持3 min，从4 min到14 min，甲醇比率由80%梯度增至100%梯度洗脱,流速为0.8 ml/min,激发波长为340 nm，发射波长为515 nm，柱温为50℃，进样量10 μl。按内标法定量。结果ODC特异性抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对ODC活性的抑制率为(59.3±5.4)%，雷帕霉素对ODC活性的抑制率为(29.8±6.4)%，姜黄素对ODC活性的抑制率为(26.1±6.6)%。结论本模型通过测定药物对ODC细胞内鸟氨酸脱羧酶的作用，利用HPLC分离法测定在药物抑制影响下的鸟氨酸脱羧酶的活性，这一模型有望成为筛选ODC抑制剂的快速方便准确的检测方法。

    L-鸟氨酸脱羧酶；L-鸟氨酸脱羧酶抑制剂；筛选模型

    鸟氨酸脱羧酶(ODC)在人体内普遍存在，参与到鸟氨酸的代谢，其发挥作用的辅酶是磷酸吡哆醛，其仅占到人体细胞总的可溶性蛋白质的0.016%[1]，但是起到的作用十分重要。在人体多胺生物合成过程中，利用ODC催化鸟氨酸转化成腐胺[2]，是一种限速酶。而精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT) 是参与多胺分解代谢的关键酶,其主要作用是催化精胺和精脒转化为腐胺[3]。有研究表明，在肿瘤组织中ODC的活性显著高于正常组织，因此鸟氨酸脱羧酶成为现在的较为热点的抗癌药物靶标[4]。然而，目前虽然作为抗癌药物的ODC抑制剂是抗癌药物研究的热点之一，但是筛选抗癌药物模型较为单一，主要是使用传统的方法测定并评价，测定的结果误差较大且不够准确，而本次试验建立的ODC抑制剂筛选模型的测定方法，主要采用衍生化的高效液相色谱分析(HPLC)的方法测定ODC酶促反应后的产物。本研究方法是测定ODC催化L-鸟氨酸脱羧基反应，在一定的时间内生成的产物量，由于其产物生成的量与ODC的活性成正比，因此ODC抑制剂的作用效果可以通过产物生成的减少量来反应。在ODC与L-鸟氨酸反应过程中，其产物能够与特定的物质反应，反应后的衍生物经过高效液相色谱仪(HPLC)分析后，经过的高灵敏度的分离得到产物腐胺 ......