熊剑飞 朱长清 张柯基 吕利雄

    ·论著·

    骨髓间充质干细胞减缓急性百草枯中毒肺损伤

    熊剑飞 朱长清 张柯基 吕利雄

    目的通过骨髓间充质干细胞(BMSCs)的植入，观察其能否减缓急性百草枯中毒肺损伤。方法72只雌性大鼠随机分为3组：百草枯组、BMSCs治疗组、正常对照组，将体外分离和培养的BMSCs通过尾静脉注入3组大鼠体内，观察2周内3组大鼠的生存状况、血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)的水平变化和3组肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平。结果与百草枯组相比，BMSCs治疗组可明显延长大鼠的生存期，降低血浆中TNF-α、IL-1β的含量(P1 材料与方法

    1.1 材料 雄性SD 大鼠3只，体重(60±5)g；雌性SD大鼠72只，体重(200±10)g(上海中医药大学动物实验中心)。质量分数为20%的百草枯水剂(500 g/L，天津施普乐农药技术发展有限公司)。DMEM-F12 (Hyclone公司)， 胎牛血清(Hyclone公司)，Percoll 分离液(Sigma公司)，FITC anti-mouseCD34、CD45、CD44 和CD166(美国Biolegend公司)。大鼠IL-1β和TNF-αELISA试剂盒(上海西唐生物科技有限公司)。丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

    1.2 方法

    1.2.1 BMSCs的分离、培养与鉴定：将雄性SD大鼠颈椎脱臼法处死，无菌条件下取大鼠股骨和胫骨，无菌条件下取大鼠双侧股骨和胫骨，剔除骨表面附着的肌肉组织，在无菌洁净工作台中用无菌5 ml注射器抽取不含FBS的DMEM/F12培养液反复冲洗所取骨之髓腔，尽可能将骨髓组织多冲出。然后将冲出的骨髓细胞轻轻吹打制成单细胞悬液，用Percoll分离液分离后，将细胞重悬于10%胎牛血清的DMEM/F12培养液中，按1×105/cm2接种于25 cm2塑料培养瓶中， 置于37℃、5%CO2饱和湿度孵箱内培养。培养24 h后弃掉未贴壁细胞，贴壁细胞初期为单个圆形细胞，3～5 d后逐渐可见为梭形或多边形明显的集落生长。以后每2～3天换液1次，细胞长至80%～90%汇合后，大多数呈较均匀的梭形或纺锤形，用含0.02% EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1 min，加适量血清终止消化，离心后重悬，按1∶3传代。取第3代细胞，流式细胞仪检测第3代细胞表达CD44、CD166,CD34和CD45不表达 ......