王东彬 黎玮 杨书文 瞿长宝 乔娜 蔡文清

    ·论著·

    肾上腺髓质素对肾肿瘤细胞PI3K/Akt/eNOS/VEGF信号通路的作用

    王东彬 黎玮 杨书文 瞿长宝 乔娜 蔡文清

    目的研究肾上腺髓质素(ADM)对肾肿瘤细胞磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路的影响。方法将肾肿瘤细胞分为对照组、ADM组、VEGF组，ADM+VEGF受体抑制剂组，ADM+ADM shRNA组,每组设置24 h、48 h、72 h 3个时间梯度,western-blot检测对照组和ADM组细胞总蛋白中PI3K、Akt、eNOS、VEGF表达;检测VEGF组，ADM+VEGF受体抑制剂组和ADM+ADM shRNA组细胞总蛋白中PI3K、Akt、eNOS的表达。结果PI3K、Akt、eNOS、VEGF在ADM组各时间梯度组肾肿瘤细胞中表达明显高于其在对照组细胞的表达(P0.05)。结论ADM可激活PI3K/Akt/eNOS/VEGF信号通路；VEGF受体抑制剂不能阻断ADM 激活PI3K/Akt/eNOS信号通路。ADM一方面通过VEGF发挥肾肿瘤血管生成作用，另一方面通过其受体激活PI3K/Akt/eNOS信号通路参与肾肿瘤血管生成作用。ADM可能成为抗血管治疗肾肿瘤新的靶点。

    肾上腺髓质素；血管内皮生长因子；磷脂酰肌醇-3激酶；蛋白激酶B；内皮型一氧化氮合酶；肾肿瘤

    抗VEGF治疗已经成为治疗进展期肾细胞癌最有效的治疗策略,已有多种药物应用于临床,但部分患者治疗效果不满意，表明在已知治疗靶点外，还存在其他血管生成因素。肾上腺髓质素(ADM)有希望成为下一个抗血管生成治疗肾细胞癌的靶点。本实验目的为明确ADM在肾细胞癌血管生成信号通路的作用以及此作用与血管内皮生长因子(VEGF)的关系。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株 人肾癌786-0细胞由北京协和大学基础研究所提供。

    1.2 主要试剂 ADM纯品和山羊抗兔二抗购于北京博奥森公司,兔抗人eNOS抗体购于美国ABCam公司。ADMshRNA，VEGF纯品，VEGF受体抑制剂，兔抗人Akt抗体，兔抗人PI3K抗体和小鼠抗人VEGF抗体购于美国santa cruz公司，RPMI1640细胞培养干粉购于美国Gibcobrl公司，胎牛血清购于北京华美公司，考马斯亮兰蛋白定量盒由上海科兴生物科技有限公司提供。

    1.3 主要仪器 BIX-311二氧化碳培养箱 ......