游崇登 何勤 刘琳 朱鸿斌 汤宏宇 张利娟 贺振新

    多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是浆细胞的恶性肿瘤。是多发于老年患者的一种血液系统恶性疾病，其自然病程具有高度异质性，中位生存期为3～4年。随着硼替佐米等蛋白酶体抑制剂及沙利度胺、雷利度胺等免疫调节剂的临床应用，MM的完全缓解率(complete remission，CR)及总生存期(overall survival，OS)有了显著提高，但复发、难治仍是临床面临的巨大难题，至今MM仍是一种无法治愈的疾病。DNA甲基化是血液肿瘤抑癌基因失活的常见机制。死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase，DAPK)是Deiss等[1]在功能性基因克隆中首先发现的一种抑癌基因，其位于人类第9号染色体的q34.1，编码序列全长4 293 bp，广泛参与多种途径介导的细胞凋亡。DAPK具有参与细胞凋亡、抑制细胞迁移等生物学功能。DAPK基因启动子区甲基化对疾病的进展及预后影响不一。本文采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)及甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术，从DNA甲基化和基因表达的方面研究MM患者及对照组的骨髓单个核细胞中DAPK基因启动子区甲基化阳性率及其mRNA的表达水平，探讨它们之间可能存在的关系及与临床特征的相关性，并研究DAPK基因在MM发生发展中的作用。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取2009年1月至2011年6月确诊的54例多发性骨髓瘤患者骨髓标本为实验组，标本来自昆明医科大学附属第一医院血液科和附属第二医院血液科，其中男35例，女19例;年龄38～79岁，平均年龄(63±9)岁，中位年龄64岁。包括初诊患者27例，复发患者27例。Druie-Salmon分期:Ⅰ期A组2例，Ⅱ期A组16例，Ⅱ期B组4例，Ⅲ期A组19例，Ⅲ期B组13例。分型:lgG型26例，lgA型14例，未分泌型9例，轻链型5例。所有病例诊断均符合标准[2]。对照组为非血液肿瘤患者骨髓标本(主要为营养不良性性贫血和免疫性血小板减少症患者)40例。

    1.2 方法

    1.2.1 主要试剂与仪器:DNA提取试剂盒，RNA提取试剂盒为杭州Axygen Bioscigens公司产品。EZ DNA Methylation-GoldTM Kit，Zymo Taq PreMix TM Kit为美国ZYMO Research公司产品。TRIzol Reagent抽提液，Platinum SYBR Green qPCR SuperMix-UDG Kit等购自美国Invitrogen公司 ......