翟俊伟 刘晓荣

    ·论著·

    抗绿脓杆菌活性物质的筛选及有效成分研究

    翟俊伟 刘晓荣

    目的从众多微生物中找到能够对抗绿脓杆菌的活性物质，分析其成分并分离鉴定，找到更有效的抗绿脓杆菌，为临床医学研究提供帮助。方法选取唐山市丰南区医院花园土进行细菌培养，通过各项研究筛选微生物，并对抗绿脓杆菌的活性成分表达条件不断优化，研究不同环境下酸碱值、培养基、时间以及温度条件下比较其活性成分，从而得出适合的发酵条件。收集发酵液，采用离子交换、硫酸铵沉淀、分子筛等方式将蛋白纯化。测定抗绿脓杆菌活性成分的敏感性、稳定性、分子量等。结果从研究的土壤中筛选出了5种菌群，经过革兰氏染色、菌落形态、RDP序列分析等操作，分析了菌株的不动细菌数以及假单胞菌属。结论拮抗绿脓杆菌的活性成分分析研究显示，活性成分不适宜在高温下存活，且容易被蛋白酶K水解，分子量大约在35 kD左右，属于抗菌蛋白。

    绿脓杆菌;活性物质;表达条件;菌落形态，发酵

    绿脓杆菌能产生多种致病物质，主要是内毒素、外毒素、蛋白分解酶和杀白组胞素等。其致病特点是引起继发感染，多发生在机体抵抗力降低时，如大面积烧伤，长期使用免疫抑制剂等。临床上常见的有皮肤和皮下组织感染，中耳炎、脑膜炎、呼吸道感染、尿道感染、败血症等[1，2]。应用抗绿脓杆菌免疫力血清可降低患者继发败血症的发生率和病死率[3]。因此研究对绿脓杆菌的抗体并分析其成分具有较高临床意义。本次研究基于这一背景，采用实验检验方式，从最初的试剂、设备准备开始，针对抗绿脓杆菌活性物质展开筛选并研究其成分，报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂本次研究由于研究重点在于绿脓杆菌方面，因此应注意实验准备工作以及相关药剂的设定，具体而言，可分为培养基的准备、实验菌种的培养、土壤样品的选取、主要实验试剂的准备以及实验需要仪器的安排等，具体如下:

    1.1.1 培养基的准备[4-6]:培养基主要有发酵培养基与LB培养基两种。发酵培养基的制备包含1 000 ml蒸馏水、5 g氯化钠、3 g葡萄糖、5 g胰蛋白胨以及3 g酵母膏，将发酵培养基的酸碱值控制在7.2～7.4，制备完成后将培养基放在121℃的高温环境中半小时来高压、高温灭菌。LB培养基的制备包含1 000 ml蒸馏水、10 g氯化钠、5 g酵母膏以及10 g胰蛋白胨，同样将制备好的培养基酸碱值调节到7.2～7.4，放在121℃的高压、高温环境中灭菌0.5 h。除上述两种培养基外，还应制备复筛培养基以及固体培养基。复筛培养基的制备主要是在蒸馏水中加入浓度为5%的氯化钠溶液、2.5%的酵母膏以及5%的胰蛋白胨 ......