刘晓荣 翟俊伟

    绿脓杆菌耐药性与外膜通透性联系及对新药筛选的影响

    刘晓荣 翟俊伟

    目的:针对绿脓杆菌进行研究，主要通过对其外膜通透性的实验了解其对不同抗生素的耐药性，从而为药物选用提供帮助。方法选取不同种类药物并制备好不同酸碱值以及浓度的溶液，培养菌体细胞并分离外膜、制备外膜蛋白、微孔蛋白处理、电泳处理与磷脂预处理、重建蛋白脂质体。结果确定了绿脓杆菌外膜微孔蛋白的分离以及纯化方面的严格步骤，证实了一些孔道形成蛋白。同时测定了几种抗生素对于绿脓杆菌外膜的通透作用。结论绿脓杆菌对多种抗生素的固有耐药性是多重外排转运体和有效通透屏障相结合的结果，因此在新药物的筛选方面，应研制克服这一耐药机制的新化合物。

    绿脓杆菌;外膜通透性;药物作用

    绿脓杆菌感染是当前临床上难以控制的疾病之一。临床上出现的数量不断增多的耐药菌株迫使我们在重新设计药物时应考虑其更广泛的耐药机制，也就是生物膜屏障与主动转运阻止药物到达其作用靶位。绿脓杆菌对多种结构不同的抗生素耐药，可以认为绿脓杆菌的耐药性与外膜通透性有关。外膜对抗生素的通透性大小直接影响到抗生素对细菌的作用，因此建立克服这一耐药机制的药物筛选模型、用于筛选新的抗绿脓杆菌化合物具有极高研究价值。

    1 材料与方法

    1.1 材料本次研究中的绿脓杆菌菌株为购买所得，可保障菌株的标准性。培养基方面，采用的是LB培养基，其中包含了蒸馏水、氯化镁、浓度为0.5%的氯化钠、0.5%的酵母浸膏粉以及1%的胰蛋白胨。将上述材料充分混合后制备成培养基。

    1.1.1 药品准备:药品准备方面，由于研究是针对绿脓杆菌的耐药性，因此研究使用的药品种类较多，如下:上海丽珠东风制定的蛋白质分子量标准、北京天象人生物公司生产的脱氧核糖酸酶以及同公司生产的十二烷基肌氨酸钠、Sigma公司生产的水苏四糖、β-辛基葡萄糖苷、双十六烷磷酸盐以及磷脂洗胆碱、Bio-Rad公司生产的Bio-Beads SM-2、本院保存的抗生素样品妥布拉霉素以及庆大霉素、中国药品生物制品检定所提供的哌拉西林、头孢克罗、头孢氨苄、美国施贵宝公司生产的氨曲南、英国格兰素公司生产的头孢他啶、大连辉瑞公司生产的头孢哌酮以及美国默沙东公司生产的亚胺培南。

    1.1.2 配制溶液准备[1-3]:溶液中蔗糖含量为20%，每升含有2 mol蔗糖，每升含有0.1 mol缓冲液(缓冲液的酸碱值为7.8)，浓度为1%的Na-EDTA溶液(酸碱值为7.8)，每升含有10 mmol磷酸钠缓冲液(酸碱值为7.0)，每升含有10 mmol的磷酸钠缓冲液(酸碱值为7.2 ......