苏远科 张国林 李纯钢

    沙门氏菌属(salmonella)是一大群寄生于人类和动物肠道内，生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌[1，2]。据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。国内外对食品中沙门氏菌的检测技术或检测方法研究并不鲜见[3-5]。这些方法大都都是对沙门氏菌的定性检测但是对沙门氏菌定量研究很少。目前，仅有SN/T0040-1992是沙门氏菌定量方法，原理是基于MPN法实现定量。SN/T0040-1992虽然可以定量检测但是缺点操作繁琐，需要稀释三个梯度或更多，每个梯度3管共9管，每个管都要进行阴阳性判断才能确定，耗时费力，同时，该方法由于从225 ml 10倍样品稀释液中取1 ml用来增菌培养存在漏检风险。本课题以肠炎沙门氏菌为例对沙门氏菌定量研究模型进行探讨，基于ELISA和细菌生长曲线应用的结合，研究沙门氏菌的定量，开发一种一种操作简单有效能够对样品中沙门氏菌本底含量检测的方法。

    1 材料与方法

    1.1 材料与仪器

    1.1.1 实验仪器:MiniVidas酶联免疫分析仪制造商生物梅里埃，恒温培养箱型号INE600制造商MEMMERT。

    1.1.2 培养基:缓冲蛋白胨水(BP)海博生物批号20120509，亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)海博生物批号20120506，四硫磺酸盐煌绿增菌液(TTB)海博生物批号20120309，亚硫酸铋琼脂(BS)海博生物批号20120417，DHL琼脂海博生物批号20120315，3M菌落总数测试片规格型号 PertrifilimTM 6406批号2013-10TP。

    1.1.3 菌株:肠炎沙门氏菌株(salmonella enteritidis)3代，大肠杆菌(escherichia coli)3代(购置中国工业菌种保藏中心)，奇异变形菌(P.mirabilis)2代(实验室分离获得)

    1.2 方法

    1.2.1 标准菌株活化:以无菌操作将菌株滤纸片放入10 mm缓冲蛋白冻水试管中，36℃培养过夜;培养液划线接种平板BS，DHL培养24～48 h;挑去单菌落接种到盛有20 ml BPW的试管中培养18 h备用 ......