李新源 郭亚民 吴新民 王皓

    作者单位: 810000西宁市，青海大学研究生院(李新源) ;青海省人民医院普外科(郭亚民、吴新民、王皓)

    大鼠急性胰腺炎Caspase-3及Survivin在胰腺组织中表达的实验研究

    李新源郭亚民吴新民王皓

    作者单位: 810000西宁市，青海大学研究生院(李新源) ;青海省人民医院普外科(郭亚民、吴新民、王皓)

    【摘要】目的检测Caspase-3及Survivin在急性胰腺炎大鼠胰腺组织中的表达并探讨其与胰腺组织损伤的关系。方法60只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、胰腺炎6 h组、胰腺炎12 h组及胰腺炎24 h组。采用胰腺被膜下注射牛磺胆酸钠(Na-Tc)建立急性胰腺炎模型。分别检测4组大鼠血清淀粉酶(AMY)、胰腺病理损伤、胰腺组织中Caspase-3及Survivin的表达程度。结果假手术组、胰腺炎6 h、12 h、24 h组组间两两比较血清淀粉酶及胰腺组织病理评分胰腺组织Caspase-3及Survivin平均光密度表达差异均有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1材料及分组选用健康雄性SPF级Wistar大鼠共60只[由甘肃省中医学院实验动物中心提供，动物许可证号: SCXK(甘) 2009-0004]，体重180～240 g，随机分成4组:假手术组、胰腺炎6 h组、胰腺炎12 h组胰腺炎24 h组，每组15只。

    1.2动物模型的制备采用胰腺被膜下注射5%牛磺胆酸钠(Na-Tc)制备AP的方法。大鼠术前禁食12 h，不禁水。用25%乌拉坦按4 ml/kg做腹腔内注射麻醉。胰腺炎组按1 ml/kg胰腺被膜下注入5%牛磺胆酸钠，假手术组仅作剖腹术，轻翻动胰腺组织，术后禁食，不禁水。

    1.3标本采集假手术组在6 h时处死，胰腺炎组在造模后6 h、12 h、24 h 3个时点分批解剖大鼠，观察胰腺大体病理变化。由腹主动脉采血3 ml，注入密封促凝采血管中静置1 h后以3 000 r/min低温离心10 min，分离血清(用于淀粉酶测定)。取部分胰腺组织浸泡在10%甲醛液后备用(用于胰腺组织病理评分及Caspase-3、Survivin免疫组化测定)。

    1.4检测仪器及试剂血清淀粉酶检测采用日本Sysmex株式会社CHEMIX-800全自动生化分析仪。取出的胰腺组织做HE染色及免疫组化。免疫组化Caspase-3、Survivin一抗、二抗试剂均购买于北京博奥森生物技术有限公司，一抗稀释比1∶500，测定平均光密度的软件为Image-Pro Plus 6.0 ......