李媛媛 张小平 刘铁军 李建民 张树波 程光

    相关研究证明饥饿对神经系统的影响非常明显[1，2]，大脑与学习记忆功能、呼吸、运动以及摄食、生殖、情绪控制等行为有关，因此饥饿状态对脑细胞损伤可能最终造成大脑功能的损害。在人类中各种疾病引起的患者昏迷或其他原因患者长期不能进食，严重消化道疾病导致营养吸收障碍，或者某些灾难(如矿井、建筑物坍塌、野外迷路等)、自然灾害(如地震、海啸、山体滑坡等)发生时，常造成遇难人员得不到食物，以及人为的长期过度节食等均可因严重营养缺乏造成大脑组织结构和功能损害，从而影响患者脑功能的恢复。因此，对于这类患者应重视支持疗法，保证维持脑功能所必需的营养供给，从而有利于脑功能保护和恢复。本实验通过制备全饥饿模型，观察全饥饿状态对大脑皮质凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达变化，探讨饥饿时限对脑组织损害机制及程度的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物:健康成年雄性SD大鼠60只，清洁级，体重(350±30)g，12周龄，由河北联合大学动物实验中心提供[动物合格证号:SCXK(冀)2009-0003]。

    1.1.2 试剂:实验所需的仪器由河北联合大学临床医学院临床实验中心提供。TUNEL试剂盒(Millipore公司);PCR反应试剂盒、逆转录试剂盒和引物(Invitrogen公司);BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天公司);Bcl-2一抗(上海Bioworlde公司);兔抗Caspase-3(Active)一抗、兔抗Bax一抗、兔抗GAPDH一抗、山羊抗兔IgG二抗、ECL发光液(Affinity公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 动物分组:60只SD大鼠随机分为6组，分别为正常对照组、饥饿3 d、5 d、7 d、9 d和11 d组。其后又将每组随机分为2个亚组Ⅰ、Ⅱ，每个亚组5只。每组Ⅰ组应用TUNEL法检测皮质区的凋亡细胞，Ⅱ组用RT-PCR和Western blot法检测皮质区 Bcl-2、Bax和Caspase-3的mRNA及蛋白表达。

    1.2.2 全饥饿模型的复制:大鼠实验前置(25±2)℃室温，自由饮食，分笼适应性喂养2周后进行实验。正常对照组给予正常饮食，饥饿3 d、5 d、7 d、9 d、11 d 组在相应的饥饿天数内禁食，但给予足量的饮水。每组Ⅰ组大鼠在达到饥饿天数后，立即以10%水合氯醛以0.30 ml/100 g体重腹腔内注射麻醉动物，在深度麻醉下用0.9%氯化钠溶液、4%多聚甲醛溶液经左心室、主动脉灌注 ......