苏春永 杨晓光

    胰腺癌是一种恶性度极高的恶性肿瘤，一经确诊仅有20%左右的患者可行根治性切除术，术后5年生存率不到25%[1]。胰腺癌的发生、增殖、侵袭以及转移等各种生物学行为涉及到多种癌基因的激活和肿瘤抑制基因的失活。原癌基因表皮生长因子(v-erb-b2 erythroblastic leukemia viral oncogene homolog 2，Her-2/neu)是一种具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜糖蛋白，通过激活酪氨酸激酶信号级联反应在肿瘤细胞间的信号传递中起重要作用[2]。环氧合酶2(cyclooxygease-2，COX-2)是介导前列腺素合成、细胞有丝分裂、细胞粘附等多种生理和病理功能的多效酶[3]。研究显示，Her-2/neu、COX-2在正常组织极少表达，而在食管癌、子宫内膜癌、膀胱癌等恶性肿瘤组织高表达，通过促进细胞增殖及新生血管形成、抑制细胞凋亡、帮助肿瘤细胞免疫逃逸等过程参与恶性肿瘤的发生发展[4-6]。但关于Her-2/neu、COX-2在胰腺癌中相互作用的机制及与预后的关系笔者所见国内外研究较少。本研究应用免疫组化法及实时荧光定量PCR法检测胰腺癌组织中COX-2及Her-2/neu的表达及与临床病理指标的关系，探讨其与胰腺癌发生、发展及预后的关系。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取2009年9月至2011年3月经我院手术切除的原发性胰腺导管腺癌组织标本50例，均经病理确诊，临床病理资料及随访资料完整。其中男30例，女20例;年龄 <50岁6例，≥50岁44例。参照1987年国际抗癌联盟(UICC)制定的胰腺癌病理分级标准，Ⅰ级12例，Ⅱ级18例，Ⅲ级20例。50例中低增殖活性13例，高增殖活性37例;有局部淋巴结及远处转移者31例，无转移者19例;生存期>1年者15例，<1年者35例。同时选取癌旁组织36例，其中男23例，女13例;年龄<50岁3例，≥50岁33例。

    1.2 试剂 兔抗人COX-2多克隆抗体、鼠抗人Her-2/neu单克隆抗体(美国Santa cruz公司);免疫组化试剂盒(北京中杉金桥技术有限公司);Trizol、Real Time-PCR试剂盒(美国Promega公司)。

    1.3 COX-2和Her-2/neu蛋白的表达检测 采用免疫组化法检测胰腺组织COX-2、Her-2/neu蛋白表达水平，参照说明书操作。将手术切除的癌组织及癌旁正常组织置于4%多聚甲醛中固定，依次进行脱蜡、水化、高压锅热修复后加入特异性一抗(稀释比例:COX-2:1∶200;Her-2/neu:1∶150)4℃过夜;加入生物素标记的二抗 ......