张蕾 徐丛剑 姜桦

    宫颈癌术前动脉灌注化疗已在临床应用了近半个世纪，其近期疗效显著，但远期疗效仍存在争议，至今仍未进入FIGO推荐的治疗方法中，其原因有待深入研究。淋巴转移是影响远期疗效的最重要因素，CD44是细胞黏附因子中与宫颈癌淋巴转移密切相关的一种。其变异型CD44V6阳性者有如下表现:血管浸润的发生明显增加;淋巴结转移率增加，受累数目增多;无复发生存期缩短，5年生存率下降[1，2]。本研究采用病史回顾性研究结合体外试验real-time PCR法测定宫颈癌Hela细胞CD44表达，初步推测宫颈癌术前灌注化疗的远期疗效存在争议的原因。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 2001至2007年复旦大学附属妇产科医院确诊宫颈鳞癌(腺癌)Ⅰb～Ⅱb期患者722例，年龄24～73岁，平均年龄41.6岁。宫颈癌分期按FIGO(2000年)标准。

    1.2 方法 对722例宫颈癌患者的临床资料进行回顾性分析，按FIGO(2000年)分期，Ⅰb期543例，Ⅱa期139例，Ⅱb期40例。按其不同治疗方式分为先行术前动脉灌注再行手术组与直接手术组。术前灌注化疗后再行手术患者186例。动脉灌注化疗药物中，使用顺铂+长春新碱+吡柔比星方案5例;PVB(顺铂+长春新碱+博莱霉素)方案2例;顺铂+表阿霉素+博莱霉素方案179例。动脉灌注化疗1次165例，2次者20例，动脉灌注化疗后加用化疗一次1例。直接手术组536例。术前动脉灌注化疗后1个月手术。手术方式均为广泛全子宫切除+盆腔淋巴结清扫(伴或不伴双附件切除)。

    1.3 短时间的顺铂作用Hela细胞后对其细胞黏附因子CD44表达的影响

    1.3.1 主要仪器与试剂:GeneAmp system PCR2400(美国PE公司产品);Thermal Cycler Dice Real Time System扩增议(Perkin Elmer公司，美国);PCR仪(Perkin Elmer公司，美国);顺铂(SIGMA公司产品);RNAiso Reagent(Takara公司);real-time试剂(SYBR PrimeScript RT-PCR Kit Takara公司)。

    1.3.2 引物设计合成 CD44引物由 TaKaRa公司设计，序列如下:正义引物 5’-GCTTCCAGAGTTACGCCCTTGA-3，反义引物 5’-AACCCTTGCAACATTGCCTGA-3;内参照β-actin正义引物 5’-GCTCGTCGTCGACAACGGCTC-3’ ......