王斯 周翠平 王敬君

    骨髓间充质干细胞又称为骨髓间充质基质细胞，其在机体的骨代谢平衡的调节中起着关键的作用[1，2]。人体增加和维持骨量的主要细胞来源即为BMSCs 分化所形成得成骨细胞，是人体骨骼维持健康的重要因素[1-3]。骨髓间充质干细胞的衰老是与人体的衰老一同发生发展的，随着骨髓间充质干细胞的逐渐衰老，其成骨分化的能力开始减弱，骨生成的能力随之降低，从而导致一系列的骨代谢性疾病[4，5]，如骨质疏松症(Osteoporosis)等[5]。(±)Bay K8644 是一种小分子化合物，是一种特异性的L 型钙通道激动剂，在研究中发现其能够通过激活L 型钙通道从而促进细胞外的钙离子内流[6，7]。我们在小分子化合物的筛选过程中发现了(±)Bay K8644 对干细胞干性标志物Nanog 的作用，通过(±)Bay K8644 干预，Nanog 在转录水平的表达出现了明显的提升。随后我们进行了一系列的相关研究，来探明(±)Bay K8644 对衰老的骨髓间充质干细胞的干性以及衰老特征的影响，同时对BMSC 的分化能力进行了相关的检测研究。

    1 材料与方法

    1.1 动物与试剂

    1.1.1 24 月龄健康雌性大鼠(n =8)用于衰老的BMSCs 的分离培养。大鼠购买自河北医科大学动物实验中心，清洁级。

    1.1.2 试剂:高糖D-MEM 细胞培养基(Hyclone，美国)、胎牛血清(Gibco，美国)，青链霉素(Coning，美国)，胰蛋白酶(Hyclone，美国)β-甘油磷酸钠、地塞米松、维生素C(Merck，美国);(±)Bay K8644(Sigma，美国)、二甲基亚砜(上海第一化学厂)、β-galactosidase染色试剂盒(Beyond，中国)、碱性磷酸酶活性定量试剂盒(Beyond，中国)、碱性磷酸酶染色试剂盒(建成生物，中国);Trizol reagent(Invitrogen，美国)、ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(TAKALA，日本)、DEPC 水(碧云天，中国)，THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix(TAKALA，日本);RIPA 细胞裂解液(BD，美国)，PMSF(Sigma，美国)，BCA 蛋白浓度测定试剂盒(赫特生物，中国)、蛋白上样缓冲液(loading buffer)(碧云天，中国)、PVDF 膜(0.45nm)(密理博，美国)、SDS-Page凝胶试剂盒、Tris-Glycine-SDS 电泳缓冲液、Tris-Tricine-SDS 转膜缓冲液、牛血清白蛋白、TBS、吐温20、anti-OCN(Abcam ......