朱鑫 王亚轩 常学良 韩振伟 滕志海 王志胜 高栩 郭绍卫 李景东 黎玮

    肾细胞癌(renal cell carcinoma，RCC)，是泌尿生殖系统中常见的恶性肿瘤，其发病率仅次于膀胱癌，肾透明细胞癌为肾癌中最为常见的病理类型，约占RCC 80%左右，近年来其发病率有上升的趋势[1]。因此，本研究以肾透明细胞癌患者为研究对象，通过观察组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)及转录因子E2F1的表达，探讨二者与肾透明细胞癌临床病理特征的关系。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集2013年7月至2014年7月我科住院手术患者的肾透明细胞癌标本51例(经病理证实均为肾透明细胞癌)，同时选取24例癌旁组织(远离癌组织5 cm以上，均经病理证实为正常肾组织)。组织学分级按照WHO 1997年推荐的Fuhrman三级分类标准，临床分期按照2010年美国抗癌协会(AJCC)RCC的TNM分期标准。所有病例术前均未进行放疗、化疗和免疫治疗。所有标本分为两份，一份经10%甲醛溶液固定，常规石蜡块包埋、切片;另一份标本术后立即以液氮快速冷冻并保存于-80℃冰箱中备用。

    1.2 实验试剂 兔HDAC1单克隆抗体及鼠E2F1单克隆抗体均购自于美国Santa Cruz生物技术公司，琼脂糖购自于西班牙公司，PCR反应体系、cDNA Synthesis Kit、RNAiso Plus、DL2000 DNA Marker均购自于日本Takara公司，ABC免疫组化试剂盒购自于美国Vector Laboratories公司。设立 GAPDH基因片段为HDAC1和E2F1基因表达的内参照;HDAC1基因上游引物:5＇-TGCAAAGAAGTCCGAGGCAT-3＇，下游引物:5＇-TGGCCTCATAGGACTCGTCA-3＇。E2F1 上 游 引 物:5 ＇-CTACGTGACGTGTCAGGACC-3 ＇，下 游 引 物:5 ＇-GGTGGGGAAAGGCTGATGAA-3 ＇。GAPDH 上 游 引 物:5 ＇-GACCACAGTCCATGCCATCA-3＇，下游引物:5＇-GAGATTCAGTGTGGTGGGGG-3＇。

    1.3 方法

    1.3.1 免疫组织化学方法:采用免疫组织化学方法检测肾透明细胞癌组织、癌旁正常肾组织中HDAC1及E2F1的蛋白表达，实验步骤严格按照试剂盒说明书进行 ......