武震东 任洪波 孙志强 刘斌 牛国栋 焦保华

    miRNAs是一种约22个核苷酸长度非编码单链小RNA，其本身不具有翻译蛋白质的功能，而是通过与mRNA的3’端非翻译区(3’UTR)的碱基序列互补配对在转录后水平调控靶基因表达。miRNA与mRNA能进行完全或近乎完全的互补配对，诱导对mRNA的切割降解，而部分碱基配对则导致功能蛋白质的转录抑制[1]。最近有文章报道miRNAs与肿瘤的关系，特别是与肿瘤恶性度及肿瘤患者的预后有密切关系[2]。亦有报道与正常组织比较，恶性肿瘤组织的miRNAs异常表达[3]。一些miRNAs具有致瘤性，而另一些则具有抑制肿瘤发生的特性。致瘤性miRNAs在癌症中高表达，通过靶向肿瘤抑制基因等各种机制促进肿瘤的发生。相反，一些具有抑制肿瘤特性的miRNAs在癌症中低表达[4，5]。我们前期研究结果显示 miR-34c在胶质瘤组织中广泛表现为低表达，且随胶质瘤级别的升高，miR-34c-3p和miR-34c-5p的表达显著降低，miR-34c-3p和miR-34c-5p的表达与胶质瘤的级别存在显著负相关。本研究采用给胶质瘤细胞系U251和U87细胞转染 miR-34c-3p和 miR-34c-5p，上调其表达，检测miR-34c对人脑胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响，旨在为胶质瘤的治疗开拓新的思路。

    1 资料与方法

    1.1 细胞株 胶质瘤细胞系U251和U87细胞购于中国科学院细胞库。正常人胶质细胞系HEB购自中国科学院广州生物医药与健康研究院。

    1.2 实验方法

    1.2.1 细胞培养:U251用含10%FBS的 DMEM-F12培养基，U87和HEB用含10%FBS的DMEM-高糖培养基，将符合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入37℃和5%CO2的培养箱内24～48 h后换液继续培养，换液的时间由细胞贴壁情况而定。培养U251、U87、HEB细胞达到指数生长期进行实验。

    1.2.2 细胞转染microRNA:转染采用LipofectamineTMRNAiMAX转染试剂，用LipofectamineTMRNAiMAX转染microRNA(mimics浓度为50 nmol/L)到细胞内，转染时使用Opti-MEM培养基 ......