胡志伟 韩国良 张英怀 张威

    >腺样囊性癌是最常见的涎腺恶性肿瘤之一，肿瘤易沿神经扩散，浸润性极强，易侵及血管造成血行性转移，单纯放疗治疗效果差，常需要术后加以放疗，为提高患者生存率与生存质量，有必要寻求新的有效治疗方案。1998年Jang等[1]首次报道白藜芦醇具有抗癌活性，可对肿瘤产生抑制活性。本实验探讨白藜芦醇与涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖及凋亡的相关性，报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料 高转移ACC-M涎腺腺样囊性癌细胞系(上海交通大学口腔医学院提供);白藜芦醇(中国药品生物制品检定所提供)。

    1.2 方法

    1.2.1 培养细胞:将RPMI1640的培养基加入到10%胎牛血清、青霉素(100 U/ml)和链霉素(100 μg/ml)中，并接种至50 ml培养瓶内，在37℃、5%CO2的恒温箱中饱和湿度培养，24～48 h传1代，使用0.04%二乙胺四乙酸二钠与0.25%胰蛋白酶(1∶1)混合液消化传代。

    1.2.2 配制药液:将20 mg白藜芦醇溶于二甲基亚砜中制备成20 mg/ml的储存液备用，使用前再用培养液稀释。

    1.2.3 进行MTT比色实验:取对数生长期细胞制备5 ×104ml的细胞悬液，接种到96 孔板中，每孔100 μl，待培养24 h后，将其加到白藜芦醇100 μl，使其终浓度各为12.5、25、50、100 和 200 μmol/L。设置不加药的对照组，每组设6个复孔。继续培养，待24、48、72 h后，每孔加入5 g/L的MTT溶液20 μl，将其培养4 h后吸去全部上清液，每孔加入200 μl的二甲基亚砜并振荡摇匀，将结晶完全溶解，置于酶标仪上测各孔的吸光度值(A)，按照公式:抑制率=(1-用药组平均A值/对照组平均A值)×100%计算生长抑制率。

    1.2.4 倒置显微镜观察:观察培养瓶内实验组和对照组50 ml的细胞在不同培养时间的生存状况。

    1.2.5 光镜观察:将细胞接种到6孔板内，孔内放置盖玻片，待爬片成功以后加入空白或含药的培养基，培养不同的时间后进行Giemsa染色，光镜观察细胞核形态。

    1.2.6 检测细胞凋亡:用相同浓度的含药培养基处理细胞不同时间后或使用空白培养基、不同浓度的含药培养基处理后，使用Annexin-V-FITC与PI双标记活细胞，使用流式细胞仪检测细胞凋亡的情况。

    1.3 统计学分析 应用SPSS 16.0统计软件 ......