论著

    miR129在胃腺癌中的表达及意义

    牟时斌牟云高峰

    作者单位： 054900河北省临西县人民医院(牟时斌);河北省民政总医院(牟云);河北医科大学第三医院(高峰)

    【摘要】目的探讨microRNA129(miR129)在胃管状腺瘤、胃癌组织及其对应的癌旁组织中的表达及其临床意义。方法收集经高年资病理医师确诊的55例管状腺瘤、76例胃腺癌组织及对应的癌旁组织，分别用原位杂交方法检测miR129的表达，分析miR129表达与临床病理参数之间的关系。结果癌旁胃黏膜组织中miR-129的表达阳性率高于胃管状腺瘤组织，胃管状腺瘤组织中miR-129的表达阳性率高于胃腺癌组织(P5 cm)作为对照，另选取胃黏膜管状腺瘤标本55例，所选标本均采用甲醛固定，石蜡包埋，按照WHO分级标准分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三级，分期采用TNM分期系统分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期。所选76例中男40例，女36例；平均年龄48岁。患者性别、年龄、分级、分期，淋巴结转移情况及Laurens分型是通过复习患者病理记录底单而获得。

    1.2主要试剂miR129互补(其碱基序列为5’-AAGTGACTGAAACGTAGCCT-3’)探针，poly d(T)阳性对照探针及miR129正义阴性对照探针均购于北京金萨卜生物科技公司，胃蛋白酶K、杂交液及NBT/BCIP显色液均购于北京中杉金桥公司。

    1.3原位杂交(1)贴附有胃癌及癌旁组织的石蜡切片二甲苯脱蜡、梯度酒精水化。(2)用胃蛋白酶室温消化90～120 s以暴露RNA的核酸片段。(3)切片滴加20 μl预杂交液40℃ 恒温处理3 h。(4)每张切片滴加20 μl稀释探针，盖上盖玻片42℃杂交过夜。(5)揭掉盖玻片，室温下，用SSC洗涤3次，滴加封闭液。(6)滴加生物素化鼠抗地高辛，37℃ 处理1 h，洗涤。(7)滴加SABC 37℃ 处理20 min,0.5 mol/L PBS冲洗。(8)玻片滴加生物素化过氧化物酶37℃ 20 min,PBS冲洗。(9)用NBT/BCIP显色试剂在玻片上染色。

    1.4结果判定标准原位杂交切片以胞浆或胞核内出现黄色或棕黄色颗粒为阳性表达判定标准，每张切片在显微镜下随机选取10个视野，每个视野均计数100个细胞 ......