梁宗英 侯继申 董晓利 张召 张旭 辛国华

    大蒜素干预下大鼠血清对食管癌EC109细胞凋亡及Survivin表达的影响

    梁宗英 侯继申 董晓利 张召 张旭 辛国华

    目的 研究大蒜素干预下SD大鼠血清诱导食管癌EC109细胞凋亡及其对Survivin蛋白表达的影响。方法 Ⅰ组:以普通灭活SD大鼠血清培养液培养食管癌EC109细胞;Ⅱ组:以大蒜素干预SD大鼠灭活血清培养液培养食管癌EC109细胞;采用AnnexinⅤ-EGFP/PI双染法和亚倍体峰法应用流式细胞仪检测2组食管癌细胞早期和中晚期凋亡率;Survivin蛋白的表达应用Western blot方法检测。结果 Ⅱ组细胞凋亡率明显高于Ⅰ组，差异有统计学意义(P<<0.05);Ⅱ组细胞中Survivin蛋白的表达水平明显低于Ⅰ组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 长期大蒜素干预下SD大鼠血清能促进食管癌EC109细胞的凋亡并抑制Survivin蛋白的表达。

    大蒜素;大鼠;食管癌;EC109细胞;细胞凋亡;Survivin蛋白

    大蒜素的主要成分为二烯丙基三硫化物，是从食用大蒜中提取出的一种具有多种生物活性的混合物[1]。研究发现，在大蒜素具有的多种生物学活性中，除抗菌杀毒、降血脂以及增加机体免疫力等常规功能外，抗肿瘤的作用最为重要[2]。近几年有学者对大蒜素抗癌作用的分子机制进行了广泛深入的研究探讨，但大蒜素对食管癌细胞的凋亡以及Survivin蛋白表达是否有影响研究较少。为了进一步研究探讨大蒜素的抗癌机制，本实验进行了应用长期大蒜素干预下SD大鼠血清诱导食管癌EC109细胞凋亡及其对Survivin蛋白表达的影响研究，为其在食管癌防治中的应用提供实验基础依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料 SD大鼠购于天津医科大学动物实验中心。食管癌EC109细胞株来自西安交通大学研究生教学实验中心。大蒜素购于徐州莱恩药业有限公司(规格:2.5 g/瓶;剂型:粉末)。AnnexinⅤ-EGFP < 试剂盒购于沈阳万类生物科技发展有限公司。小鼠抗人Survivin单克隆抗体购于天津金桥生物技术有限公司。β-Actin一抗和山羊抗小鼠二抗购于美国 Santa Cruz公司。

    1.2 方法

    1.2.1 血清制备:40只大鼠，正常饲养，无特殊处理。每日给予大蒜素15 mg·kg-1·d-1，肌内注射。24周后，取大鼠内眦静脉血，温浴离心后，分离血清。高温水浴灭活血清，过滤除菌后保存备用。

    1.2.2 实验分组:Ⅰ组:以含20%普通SD大鼠灭活血清培养液培养食管癌EC109细胞;Ⅱ组:以含20%大蒜素干预SD大鼠灭活血清培养液培养食管癌EC109细胞 ......