马小刚 杨晓光 任敬 赵峥

    siRNA靶向沉默Lipocalin-2基因下调MMP-9表达对降低人肺癌A549细胞的侵袭、迁移能力的影响

    马小刚杨晓光任敬赵峥

    【摘要】目的利用针对Lipocalin-2的小干扰RNA(siRNA)，观察Lipocalin-2基因沉默对人肺癌A549细胞MMP-9表达及侵袭、迁移能力的影响。方法采用Real-time PCR和Western blot检测Lipocalin-2在3种肺癌细胞株(A549、NCI-H661、NCI-H446)及正常人支气管上皮细胞(HBE)的表达情况。设计并构建靶向Lipocalin-2的siRNA转染A549细胞，采用Real-time PCR和Western blot检测转染效率及Lipocalin-2基因沉默对MMP-9 mRNA和蛋白表达的影响。Transwell小室检测细胞侵袭能力。细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果Lipocalin-2 mRNA和蛋白在肺癌A549、NCI-H661、NCI-H446细胞株中的表达水平均显著高于HBE细胞，差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA-Lipocalin-2转染组Lipocalin-2 mRNA和蛋白表达水平与阴性对照组和空载体对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05); siRNA-Lipocalin-2转染组MMP-9 mRNA和蛋白表达水平与阴性对照组和空载体对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05); siRNA-Lipocalin-2转染组穿膜细胞数、平均迁移距离与阴性对照组和空载体对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。结论Lipocalin-2基因沉默通过下调MMP-9表达降低了人肺癌A549细胞的侵袭和迁移能力。

    【关键词】肺癌; Lipocalin-2; MMP-9; A549细胞;侵袭;迁移

    肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，发病率和致死率极高，远处转移早，患者预后差。脂质运载蛋白-2 (Lipocalin-2)是载脂蛋白家族成员之一，在调节脂代谢、渗透压及抗炎方面发挥重要作用。近年来，国外研究发现Lipocalin-2与乳腺癌等恶性肿瘤发病密切相关，在肿瘤细胞凋亡、黏附、浸润转移等过程中扮演重要角色[1]。基质金属蛋白酶-9(MMP-9)因其降解细胞外基质和基膜的作用，参与了肿瘤的侵袭转移过程[2]。本课题组前期研究发现Lipocalin-2、MMP-9在肺癌患者血清中异常高表达，提示二者可能参与肺癌发生发展、侵袭转移过程[3]。本研究通过构建靶向Lipocalin-2基因的小干扰RNA(siRNA) ......