李燕 李静 杨洁 郝洪岭 王素云 李杰 袁军 王瑞仓

    ·论著·

    多发性骨髓瘤骨髓病理检测血管内皮生长因子的表达情况

    李燕 李静 杨洁 郝洪岭 王素云 李杰 袁军 王瑞仓

    目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)骨髓病理中，血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。方法 应用石蜡包埋的方法，经过免疫组化的相关方法对10例缺铁性贫血(对照组)的患者和40例MM患者(MM组)骨髓活检组织，检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果 在本次研究中，VEGF在MM组和对照组的表达率比较，差异有统计学意义(P1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取河北省人民医院在2013年5月至2014年8月间收治的MM患者40例为MM组，男25例，女15例；年龄40～86岁，平均年龄63岁。所有患者参考《血液病诊断及疗效标准》[2]，并根据Purie-salmen分期标准，通过骨髓细胞形态以及免疫固定电泳、全身骨扫描等明确诊断为MM，Ⅰ期10例，Ⅱ期16例，Ⅲ期14例。另外选取河北省人民医院同期缺铁性贫血10例为对照组，其中男6例，女4例。2组研究对象的一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。

    1.2 试剂 主要试剂为鼠抗人VEGF单克隆抗体，鼠抗人原始造血细胞的单克隆抗体CD34。免疫组化试剂盒为北京中山生物有限公司生产的免疫组化试剂盒，同时需要贮备烘片机、切片机、微波炉以及微量移液器。

    1.3 实验方法 标本制备的过程需要使用B65-01骨髓活检针在患者的髂前或髂后使用上棘局麻后对患者的活检取材进行抽吸的处理，并需要进行4张涂片的制作。具体为5%～10%硝酸脱钙, 其脱钙的时间根据组织大小而定，脱钙后充分冲洗、脱水,石蜡包埋、切片,切片厚约3 μm,并进行HE染色及光镜观察。3%的过氧化氢进行10 min的孵育，并且将内源性的过氧化酶的活性进行消除，微波炉抗原修复的方式进行抗原的相关处理，滴加封闭用正常血清工作液的方式进行相应的处理，并在室温的环境下进行10 min左右的孵育，鼠抗人VEGF抗体以及鼠抗人原始造血细胞单克隆抗体CD34进行处理，在4℃的环境下进行处理，滴加通用型的生物素对相应的IgG进行标记；最后需要滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，在37℃环境下30 min，DAB显色。

    1.4 判定标准 在本次研究中VEGF的评分需要按照染色强度以及阳性细胞的数量进行相应的评分[2]，其中染色强度的评分及显色度按细胞显色有无及深浅计分：没有任何染色：0分，弱染色(淡黄色)：1分，中染色(棕黄色)：2分 ......