杨蓉娟 宋春红 许艳蕾 刘雪芹 李红萍

    050011 河北省石家庄市第四医院

    ·论著·

    hTERT反义寡聚核苷酸对子宫内膜癌细胞Bcl-2蛋白含量的影响

    杨蓉娟宋春红许艳蕾刘雪芹李红萍

    050011河北省石家庄市第四医院

    【摘要】目的观察人端粒酶逆转录酶反义寡聚脱氧核苷酸对子宫内膜癌Ishikawa细胞株Bcl-2蛋白表达含量的影响。方法将2.5 μmol/L、5 μmol/L及10 μmol/L人端粒酶逆转录酶反义寡聚脱氧核苷酸与Ishikawa细胞株共同培养，于24、48、72 h采用MTT法检测细胞增殖，于48 h使用流式细胞仪检测细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达。结果人端粒酶逆转录酶反义寡聚脱氧核苷酸呈时间和剂量依赖性抑制Ishikawa细胞增殖，并可呈剂量依赖性诱导Ishikawa细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达量。结论人端粒酶逆转录酶反义寡聚脱氧核苷酸可以诱导Ishikawa细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖，该作用与降低Bcl-2蛋白表达量有关。

    【关键词】子宫内膜肿瘤；人端粒酶逆转录酶；反义寡聚脱氧核苷酸；Bcl-2

    子宫内膜癌占女性生殖系统恶性肿瘤的20%～30%，85%以上子宫内膜癌端粒酶阳性[1]。人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是端粒酶的核心组成部分，是其催化亚单位和激活限速因子。设计互补于hTERT的反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)可抑制端粒酶合成端粒，从而使细胞退出细胞增殖周期、诱导细胞凋亡。Bcl-2蛋白是调控细胞凋亡的重要基因之一，参与了子宫内膜癌的发生、发展或演变[2]。本实验观察hTERT ASODN对子宫内膜癌Ishikawa细胞株Bcl-2蛋白表达含量的影响。

    1材料与方法

    1.1hTERT ASODN的设计合成针对hTERT的mRNA序列，由起始密码子上游6个碱基及后续的14个碱基作为的靶序列，设计出互补的反义片段。另设计出一组正义寡核苷酸序列(sense oligodeoxynucleotide,SODN)作为对照，并对每一条寡聚核苷酸链进行全硫代修饰。冷藏备用。

    1.2子宫内膜癌Ishikawa细胞株培养与转染高分化子宫内膜癌Ishikawa。采用含10%新生牛血清(56℃灭活30 min)、100 U/ml青霉素、100 U/ml链霉素的RPMI-1640培养基，在37℃、5%CO2、95%饱和湿度的恒温培养箱中培养 ......