赵岩红 桑志武 曹青青 曹国斋

    ·论著·

    葡萄糖调节蛋白78在妊娠期糖尿病孕妇胎盘滋养细胞中的表达

    赵岩红桑志武曹青青曹国斋

    253800河北省故城县医院

    【摘要】目的探讨研究葡萄糖调节蛋白78在妊娠期糖尿病孕妇胎盘滋养细胞中的表达情况,了解其在妊娠糖尿病临床诊断及预后观察方面的临床意义。方法选取2014年10月至2015年10月收治的妊娠期糖尿病患者85例作为观察组,选取同时间段收治的健康妊娠期女性100例设为对照组, 2组孕妇均因不同原因分娩实施剖宫产手术，检测所有入组对象葡萄糖调节蛋白78在胎盘滋养细胞中的表达情况。葡萄糖调节蛋白78 mRNA以实时荧光定量PCR检测，葡萄糖调节蛋白78蛋白以免疫组化二步法检测，分级按照细胞染色强度实施。结果葡萄糖调节蛋白78 mRNA方面：观察组(16.2±0.6)与对照组(6.9±0.4)比较，差异有统计学意义(P0.05)。

    1.2方法

    1.2.1收集标本剖宫产术中，在胎盘娩出5 min后，选取避开出血、坏死、钙化区近脐带根部母体面中央胎盘，在无菌操作下胎盘母体面的蜕膜组织去除，即为绒毛滋养细胞层，之后剪取1 cm×1 cm大小的胎盘小叶组织2份。之后以灭菌0.9%氯化钠溶液漂洗数次，并以干纱布吸掉其水分，将其中1份标本在15 s内放置在液氮冷冻，之后放在放置在冰箱-80℃低温保存，为实时荧光定量PCR检测备用。将其中1份标本放置在中性甲醛(40 g/L)固定，石蜡包埋，连续切片(4 μm 厚)，为免疫组化二步法检测备用[4,5]。

    1.2.2实时荧光定量PCR检测葡萄糖调节蛋白78 mRNA以实时荧光定量PCR检测，根据TRIZOL(总RNA抽提试剂)的提取方法来提取细胞总RNA。依据《分子克隆实验指南》[6]，即将RNA(逆转录)→cDNA→PCR(扩增)。葡萄糖调节蛋白78为目的基因，312 bp(扩增片段长度)。磷酸甘油醛脱氢酶为内参照基因， 221 bp(扩增片段长度)。PCR循环参数，3 min预变性(94℃)，20 s变性(94℃)，20 s退火(55℃)，30 s 延伸(72℃)，共40个循环，记录熔解曲线(75℃～95℃范围内)，4℃保存。标本均设平行复孔2个，以水(无RNA酶)代替cDNA模板阴性对照，反应结束后，其荧光反应曲线电脑自动输出。对结果处理，根据内参照基因表达量归一化处理，按照下列公式计算：ΔCt=Ct(目的基因)-Ct(内参照基因)，ΔΔCt=ΔCt观察组-ΔCt对照组，葡萄糖调节蛋白78 mRNA相对表达水平=2-ΔΔCt ......