李文静 程冬梅 崔占琴 陈惠珍

    ·论著·

    17β-雌二醇对人牙髓细胞增殖影响的体外研究

    李文静程冬梅崔占琴陈惠珍

    050000石家庄市，河北医科大学第二医院口腔内科(李文静、程冬梅、陈惠珍)，口腔正畸科(崔占琴)

    【摘要】目的观察不同浓度17β-雌二醇对体外培养人牙髓细胞增殖的影响。方法选取年轻恒牙，采用组织块酶消化法获取人牙髓细胞并进行原代培养。取第4代对数生长期人牙髓细胞SABC法进行波形蛋白和角蛋白免疫组化染色鉴定细胞来源。将处于对数生长期的第4代人牙髓细胞随机分为5个实验组、1个对照组和1个空白对照组，96孔培养板每组选6个孔。实验组：在有细胞孔内分别加入含2%活性碳吸附胎牛血清的无酚红高糖DMEM培养液配置的终末浓度为10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L的17β-雌二醇。对照组：在有细胞孔内仅加入培养液。空白对照组：在无细胞孔内仅加入培养液。分别于培养48 h和72 h时用MTT 比色法检测17β-雌二醇对人牙髓细胞增殖的影响。采用流式细胞术检测各浓度组17β-雌二醇对人牙髓细胞的细胞周期的影响。结果与对照组比较，在一定浓度范围内17β-雌二醇能促进人牙髓细胞的增殖和细胞周期进程，以10-8mol/L的17β-雌二醇作用最为明显(P

    2结果

    2.1人牙髓细胞的原代培养及细胞传代牙髓组织块经消化后解离为直径约0.1～0.5 mm的组织碎块，且大多数能顺利贴壁。培养3～8 d，倒置显微镜下可见细胞以贴附组织块为中心呈放射状排列生长,细胞呈长梭形或星形，胞浆丰富，核仁清晰呈圆形。12～15 d 左右细胞覆盖孔底达80%，呈旋涡状排列，可首次传代。传代后细胞生长旺盛，状态良好，3代后呈均一的长梭形细胞。见图1、2。

    图1细胞以贴附组织块为中心呈放射状排列生长，细胞呈长梭形成星形(倒置显微镜×100)

    图2 均一的长梭形细胞呈旋涡状排列(倒置显微镜×100)

    2.2细胞来源鉴定及形态学观察免疫细胞化学染色结果显示人牙髓细胞波形蛋白染色阳性 ......