李毅坚

    葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因诊断新技术研究

    李毅坚

    目的研究分析用于葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6phosphate dehydrogenase，G6PD)缺乏症基因诊断的多重SNaPshot基因诊断技术这一新技术的检出效果，以便于有效地进行新生儿筛查，和疾病的预防。方法选取2014年7月至2015年5月既往有G6PD生育史，或孕前筛查、新生儿筛查发现的该病患者和G6PD缺乏症高风险胎儿156例为研究对象，并将研究对象随机分为观察组和对照组，每组78例。对照组采用传统的基因检测技术G6PD/6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase，6PGD)比值法，观察组则采用新的基因诊断技术-多重SNaPshot基因诊断，分别检测对G6PD和编码该酶的基因诊断，以基因测序结果为“金标准”对比2组的检出结果。结果观察组待检者检出57例患有由基因突变导致的G6PD缺乏症，总异常率为73.08%(57/78),包括错义突变的A95G型、G392T型、G1376T型、G1388A型分别为5例、3例、17例、27例，其发生率分别为6.41%、3.85%、21.79%、34.62%，同义突变5例，发生率为6.41%，男、女异常率不同，女性均为杂合子；G6PD/6PGD比值法测定的78例待检者血样中总共有52例比值结果1 资料与方法

    1.1一般资料选取2014年7月至2015年5月我院的156例既往检查生育G6PD缺陷患儿的孕妇及孕前筛查等检查怀疑为G6PD缺乏症的高风险胎儿，其中男90例，女66例；平均胎龄(4.2±21)周，平均年龄(22.8±17.5)岁。采用随机数表法将其分为观察组和对照组，每组78例。2组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

    1.2病例选择标准

    1.2.1入选标准[10,11]：追踪调查，曾生育过G6PD缺乏症患者的孕妇；经一般孕前检查和新生儿筛查初步判定为G6PD缺乏症患者，诊断标准符合张之南等主编的《血液病诊断及疗效标准》。

    1.2.2排除标准：违背伦理道德的参与研究者；其他血液学疾病导致的溶血性疾病。

    1.3检查方法

    1.3.1标本采集：抽取受检者外周血2 ml于试管中，加入肝素抗凝，6PGD缺乏症高风险胎儿则于适宜胎龄时抽取羊水10 ml。羊水和外周血均采用盐析法提取DNA，置于-20℃保存备用。

    1.3.2G6PD/6PGD比值法测定酶活性:取抗凝全血15 μl ......