王萍 张熊

    miRNA-223,-99a检测在儿童急性白血病中的临床应用

    王萍张熊

    目的探讨骨髓微小RNA(MicroRNA，miRNA)-223、-99a检测在儿童急性白血病(AL)中的临床应用。方法收集30例急性白血病患儿的骨髓染色及临床资料，分为复发组(n=13)和缓解组(n=17)，另选取健康体检儿童8例作为对照组，采用实时荧光定量PCR(Realtime-PCR，RT-PCR)技术检测儿童骨髓miR-223和 miR-99a的表达。比较分析以上两标志物在儿童急性白血病疾病中的变化。结果复发组和缓解组miR-223和 miR-99a表达与对照组比较，差异均有统计学意义(P1 资料与方法

    1.1一般资料选取2011年3月至2015年3月在我院住院的急性白血病骨髓标本30例, 其中男17例，女13例;年龄2～13岁，平均(6.7±1.9)岁。其中急性淋巴细胞白血病(ALL)19例，急性非淋巴细胞白血病(ANLL)11例。30例患儿中复发AL(复发组)13例，完全缓解(缓解组)17例。另选取选8例健康体检的正常骨髓作为对照组，其中男5例，女3例;年龄3～12岁，平均(6.2±1.7)岁。急性期出现低热、乏力和面色苍白者15例，占88.2%，皮肤再现瘀点、瘀斑者3例，占17.6%，出现骨痛者2例。ANLL用DA(正定霉素、阿糖胞昔)方案诱导缓解。ALL用VDCLPL(长春新碱、正定霉素、环磷酰胺、左旋门冬酰胺酶、强的松)方案诱导缓解。均经1个疗程完全缓解。本组已持续缓解1～12个月，平均4.5月，所有样本经骨髓细胞形态学诊断(按FAB分型)证实；缓解组患儿诊断标准为患儿白血病的症状和体征消失，白细胞分类中无白血病细胞，骨髓中原粒细胞≤5%，M3型原粒细胞+早幼粒细胞≤5%，无Auer小体，红系和巨核细胞系正常[10]。本研究经本院伦理委员会批准，且所有研究对象的家长签署知情同意书。

    1.2方法

    1.2.1标本采集:完全缓解期患者骨髓标本均为强化前采。复发病例均为化疗前采集，所有受试对象抽取骨髓0.5 ml，肝素抗凝，加Trizol裂解液充分裂解后冻存于-80℃冰箱备用。

    1.2.2总RNA抽提及逆转录:Trizol法提取总RNA，取Trizol裂解液加焦碳酸二乙酰(DEPC)水调整至4 g/L，置于冰盒备用。按照美国应用生物系统(ABI)公司逆转录试剂盒说明书提供的操作步骤进行操作，采用ABI 9700PCR反应仪逆转录合成miR-223和miR-99a特定的cDNA。逆转录反应条件设置为：16℃ 30 min ......