谢泽新 杨杨 王金烁

    ·论著·

    消癌平辅助丝裂霉素对肺癌细胞化疗增效的研究

    谢泽新杨杨王金烁

    目的通过消癌平联合丝裂霉素对肺癌A549细胞增殖，细胞周期、凋亡及相关基因表达的影响，探讨化疗增效机制。方法MTT检测消癌平(2、8、21 μl/ml)联合丝裂霉素(2 μg/nl)对肺癌A549细胞生长抑制(联合用药A、B、C组)，并设立对照组、丝裂霉素组和消癌平组；流式细胞术检测细胞周期及凋亡；RT-PCR检测P53、CyclinD1基因表达。结果MTT检测显示在24、48、72 h联合用药A、B、C组OD(光密度)均比丝裂霉素低(P1 材料与方法

    1.1细胞株人肺腺癌细胞株 A549购中国科学院上海细胞库

    1.2主要材料与试剂见表1。

    表1 本研究所用之要材料与试剂

    1.3方法

    1.3.1采用MTT法检测消癌平联合丝裂霉素对肺癌A549细胞增殖的影响:取生长状态良好、处于对数期的肺癌A549细胞，常规消化，配成单细胞悬液,显微镜下计数，以每孔8 000～10 000个细胞接种于96孔培养板中,每孔100 μl。于37℃、5%CO2培养箱中培养。24 h细胞完全贴壁后，分别消癌平浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5 μl/ml。丝裂霉素浓度： 64、32、16、8、4、2、1、0.5 μg/ml，同时设阴性对照组，各孔最终体积为100 μl。每组均复5孔。培养24、48、72 h 后，每孔加入MTT溶液(5 mg/ml)，37℃，4 h后终止培养，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值,并记录结果。采用Bliss法，借助SPSS 19.0计算出4组24、48、72 h IC50值，并绘制相应的浓度-抑制率曲线。细胞增殖抑制率(%)=[1-(实验组OD值-空白组OD值)/(对照组OD值-空白组OD值)]×100%。联合用药方案:消癌平浓度分别为32、8、2 μl/ml，并与丝裂霉素2 μg/ml两两联合用药，并设立阴性对照组及丝裂霉素单药组。观察24、48、72 h，采用MTT法测量各组OD值，并计算出抑制率。

    1.3.2流式细胞术检测各组细胞周期变化及凋亡的影响:取对数生长期的肺癌A549细胞，常规消化制成单细胞悬液(细胞终浓度为1×105/ml)后接种于培养瓶中 ......