王瑞仓 刘艳芬 杨洁 周洁 李杰 郝洪岭

    ·论著·

    IL-23诱导人外周血单个核细胞增殖及其体外杀伤MUTZ-1细胞的实验研究

    王瑞仓刘艳芬杨洁周洁李杰郝洪岭

    IL-23；MUTZ-1细胞；杀瘤活性

    骨髓增生异常综合征(MDS)是一种起源于造血干细胞的克隆性疾病，以病态或无效造血、一系或多系血细胞质/量异常、易进展为急性髓系白血病为特征，患者生存期短[1,2]。目前临床治疗MDS主要采用化疗、靶向治疗、诱导分化治疗等，但疗效均不甚满意，原因主要在于这些方法不能杀灭所有肿瘤细胞，患者极易复发[3]。近年来，随着现代生物技术的发展和对机体免疫功能认识的不断深入，免疫疗法已经成为治疗血液肿瘤的重要手段。研究显示，IL-12是调节细胞免疫应答的关键因子，能够激活T细胞、NK细胞，并促进IFN-γ分泌，且无严重毒副反应，其中IL-23是IL-12家族的重要成员，主要发挥抗肿瘤及抗肿瘤转移作用[4]。然而，有关IL-23应用于MDS治疗的报道尚少。本研究旨在探讨IL-23诱导正常人外周血单个核细胞(PBMNC)对MDS细胞系MUTZ-1的杀瘤效应及作用机制，以期为MDS的免疫治疗提供理论依据和实验基础。

    1 材料与方法

    1.1药物与试剂MUTZ-1细胞购自北京协和细胞库；重组人IL-23购自美国R&D公司；人淋巴细胞分离液购自武汉博士德生物工程有限公司；RPMI1640培养基、胎牛血清(FBS)购自美国Gibco公司；IFN-γ、TNF-α、TGF-β、颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素一抗购自美国Invitrogen公司；PrimeScriptTM RT Master Mix(Perfect Real Time)反转录试剂盒购自日本Takara公司；Trizol、实时荧光定量试剂盒购自美国Promega公司；细胞裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒、高灵敏度化学发光检测试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司。

    1.2仪器倒置显微镜购自日本Nicon公司；Chemi DocTM XRS+化学发光凝胶成像系统购自美国Biorad公司；7300型Real time-PCR扩增仪购自美国ABI公司。

    1.3实验方法

    1.3.1MUTZ-1的培养:MUTZ-1加入含10%FBS的RPMI 1640培养基，于37℃、5%CO2、饱和湿度条件下常规培养MUTZ-1细胞，每2～3天传代一次。

    1.3.2PBMNC的分离、培养及分组:采集健康人清晨空腹静脉血5 ml，肝素抗凝 ......