李涛 牛丽娟 刘文宣 杨磊 李曼 曹丹丹 彭乱顺

    ·论著·

    KLF4基因沉默对大鼠肝星状细胞HSC-T6胶原代谢的影响及机制研究

    李涛牛丽娟刘文宣杨磊李曼曹丹丹彭乱顺

    目的探讨大鼠KLF4基因沉默，对大鼠肝星状细胞HSC-T6胶原代谢的影响及其机制。方法设计并构建针对大鼠KLF4基因的3个干扰质粒(pGPU6-1，pGPU6-2，pGPU6-3)以及阴性对照。采用实时荧光定量RT- PCR(Real-time RT- PCR )和western blot的方法分析KLF4 mRNA和蛋白的表达情况，筛选出沉默最好的干扰质粒,将筛选出来的干扰质粒pGPU6-3，转染大鼠HSC-T6细胞。转染24 h和48 h后分别采用Real-time RT-PCR法和western blot的方法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13，MMP-13)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1)mRNA和蛋白的表达。Real-time RT-PCR法以GAPDH为内参照，用2-ΔΔCt法进行分析计算。western blot的方法以β-actin蛋白为内参照，进行分析。结果Real-time RT- PCR结果显示，pGPU6-3转染大鼠HSC-T6细胞后，Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1相对于对照组的mRNA表达分别下降为0.358±0.038，0.298±0.041和0.478±0.048； 而MMP-13 mRNA的表达则上升为1.712±0.034。Western Blot检测中，pGPU6-3转染大鼠HSC-T6细胞后，以β-actin为内参照，Ⅰ型胶原蛋白，Ⅲ型胶原蛋白和TIMP-1蛋白的表达分别下降为0.326±0.051，0.283±0.074和0.331±0.039；而MMP-13蛋白的表达则上升为1.273±0.038。结论KLF4基因沉默可以显著减少大鼠HSC-T6细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达，其机制与增加MMP-13表达，而抑制TIMP-1的表达有关。

    人肝星状细胞；KLF4；Ⅰ型胶原；Ⅲ型胶原；MMP-13

    肝纤维化的本质是由于细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的合成与降解不平衡所导致ECM的过度沉积。正常肝脏中ECM的主要成份是Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ，Col Ⅰ)和Ⅲ型胶原(collagen Ⅲ，Col Ⅲ)，其他胶原所占比例较少[1] ......