石文波 彭晓朋 冉瑞智 张芳 幸茂辉

    血清INTS6P1作为肝细胞癌疾病筛查新型标志物的可行性研究

    石文波彭晓朋冉瑞智张芳幸茂辉

    目的探讨血清中整合因子复合体亚基6假基因1(INTS6P1)作为肝细胞癌患者疾病筛查新型标志物的可行性。方法采用Northern杂交方法检测33例肝细胞癌患者肿瘤组织及临近肺肿瘤组织中INTS6P1的表达情况，通过细胞试验检测INTS6P1在细胞培养上清和胞内表达情况，最后检测INTS6P1在100例患者体内的表达情况。结果与临床非肿瘤组织相比，33例肝细胞癌患者肿瘤组织中的INTS6P1表达量显著降低(P=0.0066)。血清检测结果表明，肝细胞癌患者血清中INTS6P1表达水平显著低于非肝细胞癌患者(P1 材料与方法

    1.1临床组织与血液样品本研究的临床样品均采集自湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院和中国人民解放军第302医院2013至2015年治疗的肝细胞癌患者。该研究获得医院伦理委员会审批，且患者均知情。肝细胞癌组织样品和相应的临床肺肿瘤组织采集自芯片检测lncRNA 阳性的肝细胞患者。血液样品100例，HCC患者50例，慢性HBV感染患者20例，健康人群30例。血清样品采集时间为HCC患者手术治疗前7 d。新鲜组织样品在术后30 min内-80℃冷冻，直至本研究检测。所有患者为新发HCC，且未接受任何干预治疗。患者的确诊和肿瘤分期均由病理学专家完成。

    1.2细胞系HCC细胞系(Hep3B，HepG2，Huh7，MHCC97L和MHCC97H)及正常人肝脏细胞系HL-7702均购自美国菌种保藏中心，培养方法为含10% FBS(Gibco，Invitrogen，USA)、100 U/ml青霉素和DMEM培养基(Gibco，Invitrogen，USA)，5% CO2，37℃培养。

    1.3样品处理及血清总RNA提取采用EDTA血液采集管采集患者全血，4℃，1 200 g离心15 min，去除细胞。收集上清于微量离心管内，4℃，12 000 g离心15 min，完全去除细胞碎片。血清置于-80℃保持备用。采用LS TRIzol(Invitrogen，USA)试剂盒根据说明书提取血清RNA，HCC样品的细胞系总RNA采用TRIzol试剂(Invitrogen，USA)提取。

    1.4Northern blot采用TRIzol试剂提取HCC细胞系(Hep3B，HepG2，Hun7，MHCC97L和MHCC97H)和正常人源肝细胞HL-7702，向凝胶中加入20 μg RNA样品 ......