江婉蓉 王珍 何遵卫

    人凝血因子Ⅷ在基因工程中的研究进展

    江婉蓉 王珍 何遵卫

    目的 因原料血浆不足，作为治疗血友病A的唯一有效用药人凝血因子Ⅷ资源短缺，而运用基因工程生产的重组人凝血因子Ⅷ能很好的解决这些问题。本文从人凝血因子Ⅷ的结构改造、载体及表达系统、基因治疗和前沿基因编辑技术的应用等几个方面对FⅧ在基因工程中的研究进行总结及展望。

    重组人凝血因子Ⅷ；基因工程；基因治疗

    人凝血因子Ⅷ作为治疗凝血障碍性疾病血友病A的惟一有效用药，主要有两个来源。一是血浆离心后获得的冷沉淀中分离的人凝血因子Ⅷ(coagulation factor Ⅷ，FⅧ)；二是通过基因改造获得的重组人凝血因子Ⅷ(recombinant FⅧ，rFⅧ)。而利用基因工程手段生产的rFⅧ相比于FⅧ具有以下优势：(1)不受原料血浆产量的限制；(2)患者接受治疗后感染病毒性肝炎和艾滋病等传染性疾病的风险更低；(3)产品的稳定性更强。李文卿[1]研究证实了重组人凝血因子Ⅷ在中国血友病A患者的治疗中具有较好的有效性、安全性及较低的抑制物产生率。所以，面对国内凝血因子Ⅷ短缺、进口国外的基因重组凝血因子产品价格相对昂贵的困境，提高凝血因子Ⅷ的产量和利用率是一方面，另外对重组人凝血因子Ⅷ的研究和开发，生产中国自己的人重组凝血因子Ⅷ的产品，具有广阔的应用前景和积极的意义。本文从人凝血因子Ⅷ的结构改造、载体及表达系统、基因治疗和前沿基因编辑技术的应用等几个方面对FⅧ在基因工程中的研究进行总结。

    1 人凝血因子Ⅷ的结构及其改造

    1.1 人凝血因子Ⅷ的结构 自Wood等[2]克隆人凝血因子Ⅷ的基因，解析了该基因的cDNA序列，并成功表达提取rFⅧ以来，FⅧ的基因和蛋白结构逐渐被人们所探知。FⅧ的基因由26个外显子和25个内含子组成，其中14和26两个外显子最大，分别为3 106 bp和1 958 bp，全长186 kb，位于X染色体长臂末端，约占整个X染色体的0.1%。FⅧ基因经过转录、剪切后的mRNA长约9 kb，编码一条包含2 351个氨基酸残基的前体。信号肽在内质网中被水解后，形成含有2 332个氨基酸残基，6个结构域的成熟FⅧ单链蛋白。

    根据FⅧ内部序列的同源性的关系，FⅧ可分为A、B、C三种结构域,其中：A结构域可分为A1、A2、A3三种，每个约含350个氨基酸残基，具有30%的同源性，A1、A2位于重链，A3位于轻链；B结构域为重链，位于分子的中部，共有908个氨基酸残基；C结构域位于轻链的C端，分为C1、C2 ......