吴新涛 石晶 高乐才 吴文元 庞石磊

    ·论著·

    柚皮素对破骨细胞特异性基因及OPG/RANKL/RANK表达的影响

    吴新涛 石晶 高乐才 吴文元 庞石磊

    目的 观察柚皮素对破骨细胞特异性基因组织蛋白酶-K(CATK)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)及骨保护素/核因子-κB 受体活化因子配体/核因子-κB 受体活化因子(OPG/RANKL/RANK)表达的影响。方法 采用全骨髓细胞诱导法培养破骨细胞，细胞分5组：空白对照组、HG-DMEM诱导组、HG-DMEM+0.1 μmol/L柚皮素组、HG-DMEM+1 μmol/L柚皮素组、HG-DMEM+10 μmol/L柚皮素组。HE染色、TRAP染色观察破骨细胞形态；分光光度计检测TRAP阳性细胞数；Real time-PCR和Western-blot检测CATK、MMP-9、TRAP及OPG/RANKL/RANK mRNA和蛋白表达。结果 与空白对照组比较，HG-DMEM诱导组TRAP阳性细胞数、TRAP、MMP-9、CATK、RANKL、RANK mRNA和蛋白表达明显增加，OPG mRNA和蛋白表达明显降低(P1 材料与方法

    1.1 材料 高糖-DMEM(HG-DMEM)培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司；兔抗鼠CATK、MMP-9、TRAP、OPG、RANKL、RANK、β-actin多克隆抗体购自美国Santa Cruz 公司；细胞裂解液、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG抗体、BCA蛋白浓度测定试剂盒、高灵敏度化学发光检测试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司；Prime Script TM RT Master Mix(Perfect Real Time)反转录试剂盒购自日本Takara公司；Trizol、实时荧光定量试剂盒购自美国Promega公司。抗TRAP检测试剂盒购自南京建成生物研究所。

    1.2 动物 雌性SD大鼠，胸自北京维通利华实验动物技术有限公司[动物合格证号：SCXK-(京)2012-0001]体重180～215 g，清洁级，恒温、恒湿条件下饲养。

    1.3 仪器 Chemi DocTM XRS+化学发光凝胶成像系统(Biorad公司)；7300 型Real time-PCR扩增仪(美国ABI公司)；倒置显微镜(日本 Olympus 公司)。

    1.4 破骨细胞诱导培养 参照相关文献报道采用全骨髓细胞诱导培养法培养破骨细胞[5]。大鼠无水乙醚处死后，75%乙醇浸泡10 min ......