刘丽辉 石亮 王岩 谷昆峰 崔素娅 宋铁鹰

    ·论著·

    CGRP对UUO小鼠肾组织间质纤维化与炎性因子表达的干预作用

    刘丽辉 石亮 王岩 谷昆峰 崔素娅 宋铁鹰

    目的 探讨CGRP对小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化的影响。方法 选择雄性小鼠36只，建立小鼠UUO模型，前2 d治疗组和模型组分别每天给予CGRP 1.0 nmol·kg-1·d-1和同等量0.9%氯化钠溶液静脉注射。观察模型第14天肾小管损害百分比、肾间质纤维化程度、肾间质α-SMA平滑肌肌动蛋白、肾间质巨噬细胞数，单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及F4/80 mRNA的表达。结果 CGRP显著减轻肾小管损害和肾间质纤维化(P1 材料与方法

    1.1 实验对象 清洁级昆明小鼠(河北医科大学动物实验室提供，合格证号：SJL-F8-2015-5-9)36只，雄性，6～8周龄，体重(20±2)g。

    1.2 试剂 CGRP(Catalog公司)，大鼠抗小鼠F4/80多克隆抗体(Abcam公司)，小鼠抗人α-SMA单克隆抗体(Dako公司),小鼠HRP二抗。

    1.3 方法

    1.3.1 实验分组和UUO造模方法： 将实验小鼠随机分成假手术组、模型组和CGRP治疗组，每组12只。模型组和CGRP治疗组小鼠以乙醚麻醉后，行左侧输尿管结扎术，而假手术组仅游离左侧输尿管,不结扎[5]。

    1.3.2 给药方法：CGRP治疗组静脉注射 CGRP 1.0 nmol·kg-1·d-1，而假手术组、模型组给予同等量0.9%氯化钠溶液静脉注射。

    1.3.3 标本收集：在UUO术后14 d处死3组小鼠后取术侧肾组织。一半置应用4%多聚甲醛固定后用作病理切片检查和免疫组化实验；另一半置于液氮中冷冻保存，以备提取总RNA，用于荧光实时定量 PCR(RT-PCR)检测。

    1.3.4 肾组织 HE染色病理形态学观察：将4%多聚甲醛固定液固定的肾组织常规石蜡包埋切片，经HE染色后，光镜下观察肾小管间质的病理改变。对肾小管损害程度采用百分比评分法进行评估，计算20个以上高倍视野(×400)肾皮质中发生损害(肾小管扩张、萎缩、管型、坏死或小管炎)的肾小管数目和总肾小管数，以损害的肾小管数占总肾小管数的百分比表示。

    1.3.5 肾组织Masson染色病理观察：取肾组织用4%多聚甲醛固定后常规石蜡包埋切片，经Masson染色，光镜下观察肾小管间质的病理改变；采用北京航天大学医学图像采集及分析系统，光镜(×200)下采集 Masson 染色肾脏病理图像 ......