韩立杰 董稚明 刘伟 魏冬冬

    APE1/Ref-1、EGR-1在食管鳞癌中的表达及相关性研究

    韩立杰 董稚明 刘伟 魏冬冬

    目的 本研究旨在明确APE1/Ref-1和EGR-1在食管鳞癌及癌旁组织中的表达情况，并结合临床资料评估其表达与组织分级和临床分期之间的关系，为进一步研究食管鳞癌的发生发展机制提供参考依据，并为食管鳞癌的预防、诊治提供临床指标。方法 随机选取2009至2010年接受胸外科手术治疗的86例食管癌标本，术前均未经放化疗等任何抗癌治疗。采用免疫组织化学法(S-P法)测定APE1/Ref-1的蛋白、EGR-1的蛋白表达情况，对其相关性进行分析。结果 APE1/Ref-1 在ESCC组织中细胞质和细胞核联合阳性表达率为68.6%明显高于癌旁组织的联合阳性表达率8.1%，差异有统计学意义(P1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集河北医科大学第四医院2009至2010年接受胸外科手术治疗的86例食管癌标本，男63例，女23例；年龄18～70岁，平均年龄(42±3)岁。依据国际抗癌联盟食管癌TNM分期(2009)：Ⅰ、Ⅱ期47例，Ⅲ、Ⅳ期39例；组织类型均为鳞癌；高中分化55例，低分化31例。

    1.2 主要试剂与方法 APE1/Ref-1鼠抗人单克隆抗体，购自美国abcam生物技术公司，EGR-1兔抗人多克隆抗体购自美国 SANTA CRUZ 生物技术公司，SP9001兔SP检测试剂盒、SP9002鼠SP检测试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，OLYMPUSBX41光学显微镜购自日本OLYMPUS公司，Q capture图像采集系统购自加拿大QIMAGING公司。采用免疫组织化学法(S-P法)测定APE1/Ref-1的蛋白、EGR-1的蛋白表达情况。食管癌组织标本制成4 μm连续切片，常规脱蜡至水后，同一条件下进行SP法免疫组化染色。

    1.3 结果判定 光学显微镜下观察并计数，APE1/Ref-1蛋白表达阳性产物呈棕黄色细颗粒状，有3种细胞内表达模式，分别为细胞核、细胞质、细胞核和细胞质，出现这三种表达的任一种都参加计数，分别记为细胞核表达、细胞质表达和细胞核和细胞质双表达。EGR-1蛋白为细胞核表达，以胞核内出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性染色细胞。采用双盲法：随机选取10个高倍镜视野计数至少500～1 000个鳞状上皮细胞或肿瘤细胞观察其中阳性细胞的染色深浅和占计数细胞的百分比进行评分。评分方法：(1)按细胞染色有无及深浅对染色强度评分：0分为无色，2分为黄色或深黄色，3分为褐或棕褐色；(2)按阳性细胞所占的百分比评分：0分为阴性 ......