王瑜玲 段媛媛 闫会敏 梁欢 张燕

    ·论著·

    厄洛替尼通过下调CD44表达抑制非小细胞肺癌转移的机制研究

    王瑜玲 段媛媛 闫会敏 梁欢 张燕

    目的 探讨表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)下调黏附分子CD44表达抑制非小细胞肺癌转移的机制。方法 采用MTT法检测厄洛替尼对HCC827细胞株的增殖抑制效应及计算药物作用48 h的IC50；采用Transwell和划痕实验检测3组[control、EGF(50 ng/ml)刺激组、厄洛替尼(0.323 μmol/L)处理组]细胞侵袭迁移能力的变化；采用流式细胞术及Western blot 方法分别从细胞及蛋白水平检测3组[control、EGF(50 ng/ml)刺激组、厄洛替尼(0.323 μmol/L)处理组]细胞CD44表达水平变化。结果 MTT结果显示，随着药物浓度升高，厄洛替尼对细胞的增殖抑制率也逐渐增大，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 材料及试剂 HCC827(EGFR突变)购自上海中科院细胞库，RPMI-1640培养基购自美国Gibco，胎牛血清购自以色列BI公司，胰蛋白酶购自美国Gibco，表皮生长因子(EGF)购自Sigma，厄洛替尼由罗氏公司惠赠，MTT粉购自Biotopped公司，CD44-FITC 流式单克隆抗体及同型对照均购自美国BioLegnd，CD44蛋白一抗购自Abcam，化学发光二抗购自bioworld公司，Matrigel基质胶购自美国BD公司，Transwell小室购自美国Costar公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养：使用含20%胎牛血清RPMI-1640培养基培养HCC827细胞株，隔天换液，4～5 d传代，取处于对数生长期细胞进行实验。

    1.2.2 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法:取对数生长期细胞，10 000个/孔接种于96孔板中，培养至细胞单层铺满孔底。加入不同终浓度厄洛替尼(0、0.001、0.01、0.1、0.5、1、10 μmol/L)，每组6个平行复孔，并设置阴性对照组及无细胞调零组，培养48 h后加入20 μl MTT(5 g/L)，4 h后弃上清加入150 μl DMSO，震荡至底部结晶全部溶解，酶标仪测定492 nm波长下各孔吸光度(OD)值，计算药物对细胞的增殖抑制率=(阴性对照组OD值-试验组OD值)/阴性对照组OD值×100%，并采用直线回归方法计算药物半数抑制浓度(IC50)。

    1.2.3 Transwell侵袭实验：取按1∶8稀释后的Matrigel基质胶混液60 μl ......