刘苗 唐荣 姜毅

    ·论著·

    IL-6在巨噬细胞向M2型极化过程中的诱导作用

    刘苗 唐荣 姜毅

    目的 将小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞和骨髓瘤细胞系KM3细胞共培养，探讨IL-6在巨噬细胞向M2型极化的过程的作用。方法 取对数生长期细胞，分为3组：A组(KM3细胞组)，B组(RAW264.7细胞组)，C组(RAW264.7细胞+KM3细胞组)。分别予以ACTA(IL-6特异性抑制剂激活素A)或rIL-6(重组人IL-6)处理后，检测肿瘤相关M2型巨噬细胞表达标志F4/80+ CD206+的比例。RT-PCR和Westernblot方法检测各组细胞因子CCL22、IL-10、IL-12、TNF-αmRNA和蛋白表达量。ELISA法检测各组细胞培养上清中IL-6的含量。结果 RAW264.7和KM3细胞共培养24 h后，与对照组相比，M2 型巨噬细胞比例显著增加(P1 材料与方法

    1.1 试剂 新生牛血清及IMEM培养基购于Gibco公司，PI标记的抗小鼠F4/80抗体和FITC标记的抗小鼠CD206抗体购自eBioscience公司，Trizol试剂盒购于上海生工生物有限公司,RT-PCR试剂盒购于Invitrogen公司，相关一抗体(CCL22、IL-10、IL-12、TNF-α多克隆抗体)购自Cell signal公司，相应二抗体购自Pierce公司，IL-6特异性抑制剂激活素A及鼠源重组白细胞介素6(rIL-6)购自辉瑞公司，蛋白电泳marker购自Fermentas公司。ELISA试剂盒购于美国BD公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养：RAW264.7细胞 和KM3细胞购自华中科技大学同济医学院基础学院，RAW264.7细胞 和KM3细胞分别在IMEM培养基(含10%Gibco新生牛血清，100 U/ml青霉素，100 μg/ml链霉素)中常规培养。

    1.2.2 实验分组：实验分为：A组：KM3细胞组，B组：RAW264.7细胞组，C组：RAW264.7细胞+KM3细胞组，RAW264.7细胞接种于6孔板的数目为1×105/孔， KM3细胞接种于6孔板的数目为5×105/孔。

    1.2.3 流式细胞术检测：各组细胞培养24 h后，检测肿瘤相关M2型巨噬细胞表达标志F4/80+ CD206+的比例。将C组细胞分为2组，D组：RAW264.7细胞+KM3细胞+ ACTA(IL-6特异性抑制剂激活素A)；E组：RAW264.7细胞+KM3细胞+ rIL-6(重组人IL-6) ......