宋玉霞 赵涛 张玮璨 郭清 王宏卫 孟桐羽

    ·论著·

    卵巢癌细胞系SKOV3培养上清对巨噬细胞共刺激分子的影响

    宋玉霞 赵涛 张玮璨 郭清 王宏卫 孟桐羽

    目的 研究卵巢癌细胞系SKOV3培养上清处理巨噬细胞后,巨噬细胞亚型的改变，以及CD80、CD86、CD40在不同巨噬细胞亚型上表达的差异。方法 Ficoll 密度梯度法分离健康成人外周血单个核细胞，GM-CSF诱导为巨噬细胞(M0)后，用对数生长期的SKOV3细胞培养上清处理14 d后，采用流式细胞术检测巨噬细胞亚型的改变及不同亚型细胞CD80、CD86和CD40的表达情况。结果 流式细胞术检测显示，用SKOV3细胞培养上清培养巨噬细胞14 d后，巨噬细胞主要向CD163-M2型巨噬细胞分化[M1/M2=(12.37±1.76)%/(22.23±2.21)%]。CD163-M2型巨噬细胞CD40的表达较CD64-M1型显著降低，2组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论SKOV3细胞培养上清刺激后的巨噬细胞向不同巨噬细胞亚型分化；M2型巨噬细胞较M1型巨噬细胞共刺激分子表达下调，提示这些共刺激分子在巨噬细胞的活化及免疫应答过程中很重要，可能与肿瘤细胞的免疫逃逸有关。

    卵巢癌；M2型巨噬细胞；CD80/CD86/CD40

    卵巢癌是妇科肿瘤中恶性程度最高的疾病，腹膜转移是晚期卵巢癌的特征之一。晚期卵巢癌患者腹水微环境的浸润细胞包括内皮细胞、淋巴细胞、成纤维细胞、巨噬细胞等等，其中巨噬细胞是含量最丰富的免疫细胞。近年来研究发现，M2型巨噬细胞浸润数量和卵巢癌预后有显著的相关性[1]。本课题组前期研究发现，在卵巢癌晚期患者腹水中，主要是M2型巨噬细胞，而非M1型巨噬细胞。这提示M2型巨噬细胞在肿瘤的增殖及远处转移中发挥重要作用。查阅文献发现，M1型巨噬细胞和M2型在某些细胞因子的表达上有所差异[2]。本实验通过研究CD68、CD80及CD40在M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞表达的差异，初步筛选出肿瘤细胞中的关键分子靶点，为解释卵巢癌的腹腔播散和转移提供新的线索，并为卵巢癌分子靶点的干预策略提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料 1640培养基，卵巢癌细胞系SKOV3。

    1.2 方法

    1.2.1 采集健康成人外周血，Ficoll 密度梯度法收集中间层单个核细胞(1 000 r/min，20 min，23℃)， PBS重悬后再次离心 (800 r/min，7 min，23℃)。

    1.2.2 巨噬细胞培养：细胞以不含血清的RPMI1640重悬后种于100 mm细胞培养皿 ......