李燕 李嵘

    ·论著·

    奈达铂与鼻咽癌相关蛋白P53、Bcl-2、caspase的表达水平与相关性分析

    李燕 李嵘

    目的 观察奈达铂对鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响，探讨奈达铂与鼻咽癌相关蛋白P53、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、caspase的表达水平与相关性分析。方法 分析不同浓度的奈达铂(0 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml)和作用不同时间(12 h、24 h、36 h、48 h)对鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响；分析不同浓度的奈达铂对CNE-2细胞P53、Bcl-2、caspase蛋白表达水平的影响。结果 使用MTT法检测不同浓度的奈达铂对CNE-2细胞增殖的影响，随奈达铂浓度的升高OD值逐渐降低(P1 材料与方法

    1.1 实验材料 人鼻咽癌细胞株CNE-2来自于华中科技大学同济医学院病理实验室保存。

    1.2 细胞增殖测量方法 鼻咽癌CNE-2细胞生长至融合度为90%时，用胰蛋白酶EDTA消化液消化细胞，置于37℃、5%CO2饱和湿度的培养箱中培养，24 h后加入奈达铂，使之浓度梯度分别为0 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml，并设置6复孔，在37℃、5%CO2饱和湿度的培养箱中共培养，24 h后每孔加入10 μl新型细胞增殖及毒性检测溶液CCK-8(南京凯基生物科技发展有限公司 KGA317)，酶标仪在450 nm波长处检测每孔的吸光度OD值。

    1.3 细胞凋亡率测量方法 鼻咽癌CNE-2细胞生长至融合度为90%时用胰蛋白酶消化液(不含EDTA)消化细胞，离心收集细胞后用PBS洗涤细胞1次(2 000 r/min，5 min)，300 μl的1×Binding Buffer悬浮细胞，之后加入5 μl Annexin V-FITC混匀后，避光，室温孵育15 min，上机前5 min再加入5 μl的PI染色，避光放置10 min，流式细胞仪检测4组凋亡率。流式细胞仪器FASC-990购自美国ABI公司，细胞凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物科技有限公司，配套试剂购自罗氏检测公司。

    1.4 P53、Bcl-2、caspase蛋白表达水平定量分析方法 ELISA法检测 P53、Bcl-2、caspase蛋白细胞消化离心后采用南京凯基生物有限公司生产HSD细胞裂解液裂解细胞，1 000 r/min离心后获取上层清液，4℃保存待测，以标准品稀释液将标准品复溶，静置15 min后混匀，背比稀释为7个浓度，取出板条 ......