宋静 张蕴萍

    ·论著·

    干细胞动员对ALI大鼠TNF-α、IL-1β及肺泡表面活性物质保护作用分析

    宋静 张蕴萍

    目的 探讨骨髓干细胞动员对急性肺损伤(ALI)大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)及肺泡表面活性物质的影响。方法 选取清洁级健康雄性SD大鼠60只，随机分为观察组和对照组，每组30只。2组大鼠建立ALI模型，其中观察组模型建立后皮下注射重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)，对照组皮下注射等量0.9%氯化钠溶液。在干预后3 d、7 d和14 d每组处死10只，采用HE染色观察各期辐射状肺泡计数(RAC)值和湿/干重比，酶联免疫吸附法(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)TNF-α、IL-1β水平，双重免疫荧光染色检测BrdU和肺泡表面活性物质结合蛋白A(SP-A)表达。结果 观察组伤后3 d、7 d和14 d肺组织湿/干重比、IL-1β和TNF-α均低于对照组，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 实验动物 选取清洁级健康雄性SD大鼠60只，250～300 g，由大连医科大学动物实验中心提供，许可证号SCXK(军)2007-018。采用随机数字表法将大鼠随机分为观察组和对照组，每组30只。

    1.2 实验方法

    1.2.1 急性肺损伤模型建立:所有大鼠均建立急性肺损伤大鼠模型，具体方法如下：大鼠麻醉后胸背备皮，采用小型生物撞击机进行250 kPa撞击，以腋中线与右侧第四肋间交点为撞击点；随后立即注射15 mg/kg LPS(美国Sigma公司)，观察造模情况。

    1.2.2 骨髓干细胞动员:观察组于造模后皮下注射重组人粒细胞刺激因子(中国医学科学院昆明医学生物研究所生产)30 μg·kg-1·d-1以动员自体骨髓干细胞，而对照组注射等量0.9%氯化钠溶液,连续5 d，观察并记录动物的死亡情况，并于动员的第6天抽血分离获取单个核细胞,BrdU标记后经静脉注入动物体内。

    1.2.3 标本采集:分别于动员后3 d、7 d、14 d以过量3%戊巴比妥钠注射处死大鼠，将部分左肺组织于0.9%氯化钠溶液中迅速漂洗干净后，立即放入液氮中冷冻，后转入-70℃冰箱中低温保存备用，剩余左肺组以4%多聚甲醛固定，制备石蜡切片用于病理及免疫组化 ......