张艳红 段春芳 谢凭

    ·论著·

    循环肿瘤细胞对结直肠癌预后的相关性研究

    张艳红 段春芳 谢凭

    目的 研究分析肥大细胞三种亚型对结直肠癌预后可能产生的影响，从而发现肥大细胞对结直肠癌预后的影响因素，为临床指导治疗提供理论依据。方法 选择2011年资料完整的结直肠癌根治术后石蜡标本40例作为试验组，术前未放疗或化疗；另取20例正常大肠组织，作为对照组，采用双重免疫组化技术对试验组做连续切片进行染色，观察2组中各亚型构成比是否有差异。计算出40例结直肠癌患者切片中各亚型的总平均计数值，与试验组每张切片相对应的平均计数值进行比较，观察肥大细胞各亚型的数量与性别、癌的分化程度、癌的浸润深度、淋巴结转移及生存时间的关系，并总结肥大细胞三种亚型与结直肠癌之间的关系。结果 TIM在结直肠癌根治术后石蜡标本有不同程度的浸润，2组的在结直肠癌的N分期和TNM分期及肿瘤分化程度方面差异有统计学意义(P1 资料与方法

    1.1 一般资料 选择广州市番禺区南村医院2011年资料完整的结直肠癌根治术后石蜡标本40例为试验组，其中男27例，女13岁；年龄36～68岁；术前未放疗或化疗，术后随访时间在5年以上；另取40例正常大肠组织为对照组，其中男21例，女19例；年龄34～69岁，平均年龄(58±14)岁。对每个组织蜡块切片，分别做甲苯胺蓝和阿尔新蓝-藏红O染色两种特殊染色，在光镜下观察切片的肥大细胞，在40×10倍镜下，对每张切片取染色阳性密度最高的5个蜡块，该方案经医院伦理委员会讨论通过。

    1.2 方法 此次研究中，对石蜡标本进行常规脱蜡，切片厚度4 μm，脱蜡、水化，PBS溶液漂洗3次，每次漂洗3 min，将切片微波矿院修复10 min，继续采用PBS溶液漂洗3次，3 min/次，在37%下内源性过氧化物酶活性用0.3%H2O2封闭孵育20 min，甩去多与溶液，于枸橼酸钠修复液中微波修复后，将鼠抗人单抗Tryptase抗体(购自美国NeoMarkers公司，1∶4 000)滴加入其中，4℃孵育12 h，PBS溶液漂洗3次。并在洗脱的基础上进行兔的多克隆第二抗/辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠滴加，37℃孵育30 min，PBS溶液漂洗3次，滴加3,3/-二氨基联苯胺显色1 min。待其DAB显色，则应当进行苏木素复染5 min，盐酸乙醇分化，常规脱水、透明封片，镜下观察。类蛋白酶采用SP法染色，脱蜡水化，PBS溶液漂洗3次，微波抗原修复，继续漂洗，微波抗原修复，PBS溶液反复漂洗3次，滴加过氧化氢溶液，蒸馏水清晰 ......