韩文峰 魏素菊 郑亚珍

    ·论著·

    磷酸肌酸对小鼠移植性S180肉瘤血管生成的作用及机制研究

    韩文峰 魏素菊 郑亚珍

    目的 探讨磷酸肌酸(creatine phosphate,Cp)对小鼠移植性S180肉瘤血管生成的作用及其相关机制。方法 建立昆明小鼠S180肉瘤模型，60只小鼠随机分为4组：0.9%氯化钠溶液对照组(对照组)、Cp低剂量组(200 mg/kg)、Cp中剂量组(400 mg/kg)、Cp高剂量组(800 mg/kg)，观察4组小鼠移植瘤重量；流式细胞术测定基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)及金属蛋白酶组织抑制因子-2(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMP-2)蛋白的表达；免疫组化检测肿瘤组织微血管密度(microvasvular density，MVD)；RT-PCR检测移植瘤组织中血管内皮生长因子(vascular endothlial growth factor,VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(base fibroblast growth,bFGF)mRNA的表达水平。结果 对照组、Cp低剂量组和中剂量组移植瘤重量、VEGF、bFGFmRNA、MMP-2、TIMP-2水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；Cp高剂量组与对照组、Cp低、中剂量组比较，小鼠移植性肉瘤质量明显减小，MVD数显著减少，VEGF、bFGFmRNA和MMP-2蛋白表达明显减少，TIMP-2蛋白表达明显增加，差异均有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 实验材料 Cp由海南海口奇力制药有限公司提供，临用时配制，用0.9%氯化钠溶液溶解配成质量浓度为16 mg/ml，再用.9%氯化钠溶液稀释至所需浓度。RT-PCR试剂盒为Fermentas公司产品，引物为上海生物工程公司产品，Rabbit Anti-Ⅷ Factor多克隆抗体(克隆系：bs-0434R)为北京博奥森公司产品。RPMI1640培养液购自GIBCO公司，小牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司。

    1.2 细胞株与实验动物 S180肉瘤细胞株由河北医科大学第四医院科研中心传代培养，接种细胞于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中(青霉素、链霉素各100 U/ml)，培养器皿置于37℃含有5%CO2的细胞培养箱中昆明小鼠购自河北省实验动物中心[动物许可证编号：SCXK(冀)2012-1-003]。8周龄，雄性，体重18～22 g ......