吴艳芬 陈文 王鸣飞 王伟

    ·论著·

    α-硫辛酸对帕金森病大鼠脑内黑质多巴胺能神经元保护机制研究

    吴艳芬 陈文 王鸣飞 王伟

    目的 探讨α-硫辛酸(LA)对帕金森病(PD)大鼠模型脑内黑质多巴胺能神经元的保护机制。方法 60只3月龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组、实验组和药物干预组，每组20只。对照组大鼠给予背部皮下注射葵花油，实验组和药物干预组背部皮下注射鱼藤酮制备PD模型，药物干预组大鼠同时给予LA腹腔注射；采用Western blot检测大鼠中脑多巴胺能神经元中酪氨酸羟化酶(TH)、转录因子NF-E2相关因子-抗氧化反应元件(Nrf2-ARE)和血红素氧合酶1(HO-1)的表达变化；采用分光光度法检测大鼠脑内纹状体中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量变化。结果 实验组大鼠中脑TH蛋白表达比对照组明显降低(P1 材料与方法

    1.1 实验动物及分组 12周龄雄性Witstar 大鼠60只，体重(300±20)g，由河北医科大学实验动物中心提供(合格证号：SCXK冀2008-1-003)。将实验大鼠随机分为对照组、实验组和药物干预组，每组20只。所有大鼠在同一实验室按照清洁级标准饲养，期间所有大鼠自由进食进水，房间保持稳定的温度(24℃)和湿度(40%)。

    1.2 动物模型的制备及药物干预 对照组大鼠给予背部皮下注射葵花油1 ml·kg-1·d-1，实验组和药物干预组大鼠按照2.0 mg·kg-1·d-1背部皮下注射鱼藤酮(鱼藤酮溶解在葵花籽油中充分震荡混匀)，药物干预组大鼠在鱼藤酮注射前半小时给予LA 20 mg·kg-1·d-1腹腔注射，共30 d。

    1.3 实验动物的取材及组织匀浆制备 每组各取8只大鼠断头处死，在冰板上分离中脑和纹状体液氮速冻后，-80℃保存备用。匀浆制备时，取纹状体和中脑称重，放入匀浆器，按1∶9(组织重量与裂解液体积比)比例加入RIPA裂解液，匀浆器放在冰浴中，超声匀浆器以2 000 r/min匀浆20次，然后吸至1 ml离心管中。4℃放置30 min。低温离心10 000 g，30 min。小心吸出上清分装，-80℃储存备用。

    1.4 蛋白浓度的测定(BCA 法) 蛋白浓度的测定按照BCA蛋白测定试剂盒说明书上的步骤，取一酶标板，各孔加入 200 μl BCA 工作液，取稀释样品 10 μl加入各孔中，在振荡器上将各酶版孔中的液体混匀，将酶标仪开机问题调至37℃，将酶标版放入30 min，然后562 nm下比色测定。并根据所测样品的吸光值 ......