马荣芬 陈秋英 刘艳芬

    ·论著·

    SSBP1在肝癌组织中的表达及意义

    马荣芬 陈秋英 刘艳芬

    目的 观察线粒体单链DNA结合蛋白(SSBP1)在肝癌组织的表达及意义。方法 收集2013年12月至2016年12月手术切除的肝癌患者组织标本80例，采用Real time-PCR和免疫组化SP法检测80例肝癌组织和癌旁组织SSBP1 mRNA和蛋白表达状况，分析其与临床病理参数的关系，并检测SSBP1在肝癌细胞株HepG2、MHCC97H、SMMC7721、Huh7及正常人肝细胞L-02的表达状况。结果 SSBP1在肝癌组织和癌旁组织的表达水平和阳性表达率分别为1.87±0.23、0.36±0.05和80.00%(64/80)、15.00%(12/80)，SSBP1在肝癌组织的表达水平和阳性表达率显著高于癌旁组织，差异有统计学意义(P1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取我院2013年12月至2016年12月经肝胆外科手术切除的肝癌组织石蜡标本80例，术后均经病理确诊。癌旁组织取自来源于同一标本的距肿瘤边缘>2 cm的正常肝组织。其中男49例，女31例；年龄35～76岁，平均年龄(60.68±7.13)岁，≤60岁44例，>60岁36例；肿瘤直径≤5 cm 28例，>5 cm 52例；AFP≤200 μg/ml 30例，>200 μg/ml 50例；TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期37例，Ⅲ+Ⅳ期43例；分化程度：高+中分化35例，低分化45例；33例无门静脉癌栓，47例有门静脉癌栓；30例无淋巴结转移，50例有淋巴结转移。所有患者术前均未接受过放、化疗及生物治疗，临床病理资料完整。患者术后随访5年。

    1.2 细胞、试剂与仪器 人肝癌细胞株(HepG2、MHCC97H、SMMC7721、Huh7)及正常人肝细胞L-02购自上海吉凯基因化学技术有限公司；RPMI 1640培养基购自美国Invitrogen公司；Trizol、实时荧光定量试剂盒购自美国Promega公司；兔抗人SSBP1购自美国Santa Cruz公司；免疫组化试剂盒购自日本Takara公司；Chemi DocTM XRS+化学发光凝胶成像系统购自美国Biorad公司；全自动7300型荧光定量PCR扩增仪购自美国ABI公司。

    1.3 方法

    1.3.1 免疫组化:采用免疫组织化学染色 SP法测定SSBP1表达，严格按照试剂盒说明书操作，用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。判定标准：SSBP1阳性染色的判定标准为细胞质内检出棕黄色或棕褐色颗粒 ......