马荣芬 陈秋英 刘艳芬

    ·论著·

    靶向沉默SSBP1基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响

    马荣芬 陈秋英 刘艳芬

    目的 观察靶向沉默线粒体单链DNA结合蛋白(SSBP1)基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响。方法 设计并构建靶向SSBP1 基因的特异性siRNA，采用脂质体介导瞬时转染肝癌HepG2细胞，细胞分3组：对照组、空白转染组、转染组。Real time-PCR和Western-blot检测靶向干扰后SSBP1 mRNA和蛋白表达变化。CCK-8法检测细胞增殖。流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率及线粒体膜电位。划痕实验及Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭转移能力。Western-blot检测增殖、侵袭转移相关基因蛋白表达状况。结果 SSBP1 siRNA能够显著抑制SSBP1 mRNA和蛋白表达。与对照组和空白转染组比较，转染SSBP1 siRNA后HepG2细胞增殖能力、G2期和S期细胞比例、线粒体膜电位明显降低，G1期细胞比例、细胞凋亡率明显升高(P1 材料与方法

    1.1 细胞、试剂与仪器 人肝癌细胞HepG2购自上海吉凯基因化学技术有限公司；RPMI 1640培养基、SSBP1 siRNA、LipofectamineTM 2000购自美国Invitrogen公司；Trizol、实时荧光定量试剂盒购自美国Promega公司；兔抗人PCNA、Bcl-2、Bax、MMP-9多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司；细胞裂解液、辣根过氧化物酶标记的抗鼠IgG抗体、BCA蛋白浓度测定试剂盒、高灵敏度化学发光检测试剂盒购自日本Takara公司；Chemi DocTM XRS+化学发光凝胶成像系统购自美国Biorad公司；全自动7300型荧光定量PCR扩增仪购自美国ABI公司；FACS Calibur型流式细胞仪购自美国BD公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养及转染:人肝癌细胞HepG2用含10% FBS、1%青/链霉素的DMEM培养基在37℃、5% CO2、饱和湿度条件下常规培养。待细胞达到90%融合时利用脂质体LipofectamineTM 2000试剂盒进行转染，具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。细胞随机分为3组：对照组(不进行转染处理)、空白转染组(转染空质粒)、转染组(转染siRNA SSBP1)。

    1.2.2 Real time-PCR:Trizol提取细胞总RNA，按照试剂盒说明书加样进行逆转录反应，ABI 7300型荧光定量PCR仪扩增 ......