王瑞仓 刘艳芬 杨洁 周洁 李杰 郝洪岭

    ·论著·

    IL-23诱导人外周血单个核细胞对MUTZ-1细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响

    王瑞仓 刘艳芬 杨洁 周洁 李杰 郝洪岭

    目的白介素-23(IL-23)诱导人外周血单个核细胞对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系MUTZ-1增殖、凋亡及相关基因表达的影响。方法采用密度梯度离心法分离获得正常人外周血单个核细胞(PBMNC)，细胞分4组：阴性对照组(未加IL-23)，3个浓度IL-23组(2、10、50 ng/ml)，体外诱导72 h，并与MUTZ-1共培养。MTT实验检测MUTZ-1细胞增殖。流式细胞仪检测MUTZ-1细胞凋亡和细胞周期变化。Real time-PCR和Western-blot检测MUTZ-1细胞Bax、Bcl-2、caspase-3、survivin mRNA和蛋白表达。结果2、10、50 ng/ml IL-23诱导的PBMNC与 MUTZ-1细胞共培养后，MUTZ-1细胞增殖速度、S期细胞比例明显降低，细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例明显增加，呈时间和浓度依赖性，与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 药物与试剂 MUTZ-1细胞购自北京协和细胞库；重组人IL-23购自美国R&D公司；人淋巴细胞分离液、CCK-8试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；RPMI1640培养基、胎牛血清(FBS)购自美国Gibco公司；caspase-3、survivin一抗购自美国Invitrogen公司；PrimeScriptTM RT Master Mix(Perfect Real Time)反转录试剂盒购自日本Takara公司；Trizol、实时荧光定量试剂盒购自美国Promega公司；细胞裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒、高灵敏度化学发光检测试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司。

    1.2 仪器 倒置显微镜购自日本Nicon公司；Chemi DocTM XRS+化学发光凝胶成像系统购自美国Biorad公司；7300型Real time-PCR扩增仪购自美国ABI公司。

    1.3 实验方法

    1.3.1 MUTZ-1的培养:MUTZ-1加入含10%FBS的RPMI 1640培养基，于37℃、5%CO2、饱和湿度条件下常规培养MUTZ-1细胞，每2～3天传代1次。

    1.3.2 PBMNC的分离、培养及分组:采集健康人清晨空腹静脉血5 ml，肝素抗凝，PBS 1∶1稀释，采用Ficoll密度梯度离心法分离得到PBMNC ......