李敬东 李峰山 崔竞飞 代亚欣 赵军伟 赵中华 梁锐英

    ·论著·

    牙龈鳞癌中PTEN基因启动子甲基化状态及预后分析

    李敬东 李峰山 崔竞飞 代亚欣 赵军伟 赵中华 梁锐英

    目的探讨牙龈鳞癌中PTEN基因启动子甲基化状态及其预后的价值。方法以唐山市协和医院2005年9月至2010年9月收治的牙龈癌患者石蜡标本30例为研究对象，从中随机抽取高、中、低分化各10例(共30例)，用甲基化特异性PCR法检测其PTEN基因启动子区甲基化的状态，统计这些病例PTEN启动子区的甲基化状况，结合牙龈癌患者病历资料和随访信息，采用Kaplan-Meier方法绘制生存曲线，分析PTEN甲基化状态与牙龈癌预后的相关性。结果30例牙龈鳞癌中PTEN启动子甲基化率为36.7%，且N分期甲基化率高于T分期；PTEN启动子甲基化情况与牙龈鳞癌患者的N分期、细胞分化程度有显著相关性(P1 资料与方法

    1.1 一般资料 以唐山市协和医院2005年9月至2010年9月收治的牙龈癌患者石蜡标本为研究对象。纳入研究对象的标准：(1)经唐山市协和医院病理科诊断为牙龈癌；(2)患者于唐山市协和医院口腔颌面外科行牙龈癌原发灶切除术，且同期行颈淋巴结清扫术；术后联合放疗;(3)诊断患有牙龈癌并进行手术治疗的患者的记录和随访时间超过60个月，随访资料完整。排除标准：(1)先前治疗过的牙龈癌患者;(2)头颈部照射病史;(3)癌症主要涉及口腔颊、舌头和上颌窦及其次入侵牙龈的患者;(4)初次诊断时由于远处转移未接受手术治疗的患者。从中随机抽取高、中、低分化各10例(共30例)。从以上30个病例中抽取10例癌旁正常牙龈组织做为对照。

    1.2 主要试剂与仪器 甲基化处理试剂盒(美国ZYMO公司)；人阳性和阴性标准品(美国ZYMO公司)；DNA纯化回收试剂盒(天根生化科技有限公司)；Taq酶、PCR相关试剂(日本Takara公司)；T载体连接试剂盒(北京全式金生物技术有限公司)。NAS-99分光光度计(ACTGene公司)；BC-subMIDI电泳仪(北京百晶公司)，JY300C电泳槽(北京公司)；1～14离心机(Sigma公司)；Verity PCR仪(ABI公司)；HW·SY11-K台式恒温金属浴(TomosBiotools公司)；SW-CJ-2D超净工作台(苏州净化工程技术有限公司)。

    1.3 PTEN基因启动子甲基化检测 采用MSP法进行PTEN基因启动子甲基化检测，以ZYMO购买的阴性和阳性标准品作对照。引物设计参照文献进行，PTEN基因甲基化引物：F:5’GTTTGTTTTTAGGGTAGTAGGC ......