庞真贞 李硕 刘钦赞 李晔 王良

    牙周膜干细胞是从牙周膜组织中分离出的干细胞，是牙周组织功能首选中西细胞，具有自我更新能力，可分化为牙骨质、牙周膜以及牙槽骨[1,2]。传统的牙周病治疗主要是消除病因，难以修复已丧失的牙周组织。牙髓干细胞具有多向分化的潜能，它除了能形成矿化结节能力的细胞外，经过不同细胞因子的诱导，还能够分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、血管内皮、肝、神经等细胞系类型[3,4]。牙髓组织位于牙齿内部的牙髓腔内，是牙体组织中唯一的软组织[5]。通过对人牙髓细胞的研究，发现了一种与骨髓间充质干细胞有着极其相似的免疫表型及形成矿化结节能力的细胞，细胞中形态呈梭形，可自我更新和多向分化，有较强的克隆能力[3]。这些由牙髓组织中分离出的成纤维状细胞称为牙髓干细胞(dental pulp stem cells)。目前认为牙周膜干细胞与牙髓干细胞是口腔乃至全身多种组织再生极有应用前景的两种间充质干细胞，本文分析2种干细胞的表型及生长特性。

    1 材料与方法

    1.1 材料 2018年7至12月选择18～25岁因正畸拔除完整第三磨牙10颗。

    1.2 纳入与排除标准 (1)纳入标准：牙齿健康，双尖牙或第三磨牙，患者对治疗知情同意，对本研究也知情同意。(2)排除标准：合并根尖病，龋齿，牙周病。

    1.3 试剂与仪器 20%胎牛血清，DMEM，细胞筛网。

    1.4 干细胞纯化扩增方法[6]

    1.4.1 牙周膜干细胞：拔除后置入含3倍抗体的PBS液中，在超净台，用PBS液从牙根到牙冠方向冲洗5次，清除血污，灭菌手术刀片刮根中下1/3牙周膜组织，置入离心管，加消化液，37℃下消化30 min，每5分钟摇晃离心管1次。加2 ml含20%胎牛血清，1 000 r/min离心，5 min，去上清，转入35 mm培养皿，37℃，5%CO2，培养，组织块贴壁过夜，第2天补加1.5 ml 原代细胞培养液。待细胞汇合至80%，进行传代。

    1.4.2 牙髓干细胞：取上述刮牙周膜组织牙齿，切开牙冠，暴露牙髓，取出牙髓，浸入3倍双抗PBS中，后续操作同上，待细胞汇合至80% ......