杨家敏 李惊雷

    结肠癌是世界上第三大常见癌症，癌预后一般较差，5年总体生存率低于5%，这种低生存率主要是由于诊断较晚以及缺乏有效的非手术治疗方法[1]。寻找更好的药物治疗这种致命的肿瘤是迫切需要的。癌细胞对化疗药物反应的一个关键因素是细胞凋亡通路的激活，而这种通路在抗化疗的癌细胞中经常受损[2]。磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路紧密调控细胞存活与凋亡的平衡，Akt是PI3K的下游效应因子，引起肿瘤细胞存活/抑制凋亡，在不同凋亡信号的刺激下通过磷酸化诱导下游靶点刺激血管生成[3,4]。因此，Akt信号正成为癌症化疗和治疗的一个有希望的靶点。阿帕替尼是一种新型的血管内皮生长因子2(VEGFR2)酪氨酸激酶高选择性抑制剂，可以显著抑制肿瘤组织中新生血管的生产，其结合亲和力是索拉非尼的10倍以上[5]。通过Ⅲ期临床试验证明，阿帕替尼是惟一有效的晚期胃癌患者治疗药物，且没有化疗适应证[6]。同时，在多个Ⅱ期临床试验结果显示，阿帕替尼中对多种肿瘤显示出了很好的治疗效果[7]。但我们对该药物分子机制的了解仍然有限，尚不清楚阿帕替尼是否对肠癌有抗肿瘤作用。因此，本研究探讨甲磺酸阿帕替尼通过PI3K/Akt信号通路对HCT-116细胞增殖/凋亡的影响，探讨甲磺酸阿帕替尼对肠癌的作用机制，为临床应用甲磺酸阿帕替尼治疗肠癌奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器 结肠癌HCT-116细胞(中国科学院典型培养物保藏中心昆明细胞库，中国)；甲磺酸阿帕替尼片(江苏恒瑞医药股份有限公司，中国)；胎牛血清(Gibco公司，美国)；RPMI-1640培养基(Hyclone公司，美国)；0.25%胰蛋白酶(天津百赛思试剂公司，中国)；青链霉素溶液和胰酶(Corning公司，美国)；四噻唑蓝(MTT)(Amresco公司，美国)；细胞凋亡检测AnnexinV/PI试剂盒(BD公司，美国)；蛋白抽提试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司，中国)；鼠抗PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax和Caspase-3单克隆抗体(Santa Cruz公司，美国)；鼠抗GADPH单克隆抗体和辣根过氧化物酶HRP标记山羊抗鼠IgG二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司 ......