武凤莲 朱东来 王嘉欣 王连英

    伤口愈合的过程本身就是一个动态的、错综复杂的，同时受很多因素影响，其过程主要包括三个阶段:炎性反应阶段、肉芽组织形成阶段和基质形成或重构阶段[1]。当伤口愈合阶段发生任何变化时，就会导致个体产生病理性瘢痕[2]。这些病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩[3]。增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的传统治疗包括按摩压迫治疗、硅胶治疗、激光治疗、光疗和放疗[4]。几种新兴的治疗方案包括腔内冷冻治疗，腔内注射5-氟尿嘧啶(5-Fu)、干扰素和博莱霉素[5]。尽管治疗增生性瘢痕有很多方法，但每种方法都有局限性。已有研究报道了A型肉毒毒素(BTXA)在治疗增生性瘢痕中的应用，并取得了良好效果[6,7]。 BTXA减轻早期增生性瘢痕瘙痒症状，部分抑制瘢痕萎缩，促进瘢痕软化，减少挛缩作用，也有研究观察到抑制成纤维细胞增殖和胶原分泌，但其分子机制尚不清楚[6,8]。为研究BTXA对增生性瘢痕成纤维细胞的影响，探讨BTXA对增生性瘢痕调节的分子机制，采用MTT法、罗丹明123染色、H2DCFDA荧光检测瘢痕成纤维细胞内的活性氧ROS,qPCR等方法研究不同浓度BTXA对增生性瘢痕成纤维细胞的影响。我们特别确定了BTXA对增生性瘢痕成纤维细胞生长因子aFGF和bFGF的影响，这些是影响增生性瘢痕组织中细胞异常增生和分化，胶原等细胞外基质过度分泌沉积的重要影响因素[9]。本研究为肉毒毒素的临床应用提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 瘢痕组织标本 标本来源于2016至2018年我院整形烧伤外科的门诊及住院患者，患者近期激光、放射线及其他药物治疗，病程3个月～4年。瘢痕部位包括面部、上肢、胸背部，取标本前均得到患者的知情同意。

    1.2 化学药品与仪器 BTXA(兰州生物制品研究所)， DMEM培养基(Gibco公司 USA)，Trizol 总RNA提取试剂盒美国 PROMEGA公司，逆转录试剂盒、taq酶购于日本TAKARA；染色罗丹明123、MTT、DMSO购于SIGMA US,H2DCFDA购自 Invitrogen， 新生小牛血清(杭州四季青公司)，荧光显微镜，流式细胞仪，PCR 仪器。

    1.3 增生性瘢痕成纤维细胞的培养 将取下的手术标本按无菌操作程序反复冲洗3次后，剪去多余皮下组织后，将只保留带表皮的瘢痕组织剪成所需大小的小组织块，缓冲液反复冲洗干净后接种于含有培养液的培养方瓶中，在特定条件的孵箱进行瘢痕成纤维细胞原代的培养 ......